(一)原理

于试样中加入饱和氯化钠溶液，在碱性条件下进行萃取，分离出蛋白质、脂肪等，然后酸化，用乙醚提取试样中的苯甲酸，再将乙醚挥发掉，溶于中性醚醇混合液中，最后以标准碱液滴定。

(二)仪器和试剂

1．仪器

(1)碱式滴定管。

(2)300 mL烧杯。

(3)250 mL容量瓶。

(4)500 mL分液漏斗。

(5)水浴箱。

(6)吹风机。

(7)分析天平。

(8)锥形瓶。

2．试剂

(1)纯乙醚：置乙醚于蒸馏瓶中，在水浴上蒸馏，收取35℃部分的馏液。

(2)盐酸(6 mol／L)。

(3)氢氧化钠溶液(100g／L)：准确称取氢氧化钠100g于小烧杯中，先用少量蒸馏水溶解，再转移至1000mL容量瓶中，定容至刻度。

(4)氯化钠饱和溶液。

(5)纯氯化钠。

(6)95％中性乙醇：于95％乙醇中加入数滴酚酞指示剂，以氢氧化钠溶液中和至微红色。

(7)中性醇醚混合液：将乙醚与乙醇按1：1体积等量混合，以酚酞为指示剂用氢氧化钠中和至微红色。

(8)酚酞指示剂(1％乙醇溶液)：溶解1g酚酞于100mL中性乙醇中。

(9)氢氧化钠标准溶液(0.05mol／L)：称取纯氢氧化钠约3g，加入少量蒸馏水溶去表面部分，弃去这部分溶液，随即将剩余的氢氧化钠(约2g)用经过煮沸后冷却的蒸馏水溶解并稀释至1000 mL，按下法标定其浓度。

氢氧化钠标准溶液的标定：将分析纯邻苯二甲酸氢钾于120℃烘箱中烘约1h至恒重冷却25min，称取O.400Og于锥形瓶中，加入50ml蒸馏水溶解后，加入2滴酚酞指示剂，用上述氢氧化钠标准溶液滴定至微红色1min不褪色为止。

按以下公式计算氢氧化钠溶液的浓度：

c=m*1000/V*204.2

式中：c——氢氧化钠溶液的浓度，mol／L；

m——邻苯二甲酸氢钾的质量，g；

V——滴定时使用的氢氧化钠溶液的体积，mL；

204.2——邻苯二甲酸氢钾的摩尔质量，g／mol。

(三)操作步骤

1．样品的处理

(1)固体或半固体样品：称取经粉碎的样品100g置500mL容量瓶中，加入300mL蒸馏水，加入分析纯氯化钠至不溶解为止(使其饱和)，然后用100g／L氢氧化钠溶液使将其调整至碱性(石蕊试纸实验)，摇匀，再加饱和氯化钠溶液至刻度，放置2h(要不断振摇)，过滤，弃去最初10mL滤液，收集滤液供测定用。

(2)含酒精的样品：吸取250mL样品，加入100g／L氢氧化钠溶液使其至碱性，置水浴上蒸发至约100 mL时，移入250 mL容量瓶中，加入氯化钠30g，振摇使其溶解，再加氯化钠饱和溶液至刻度，摇匀，放置2h(要不断振摇)，过滤，取滤液供测定用。

(3)含脂肪较多的样品：经上述方法制备后，于滤液中加入氢氧化钠溶液使至碱性，加入20～50mL乙醚提取，振摇3min，静置分层，溶液供测定用。

2．提取

吸取以上制备的样品滤液100mL，移入250mL分液漏斗中，加6mol／L盐酸至酸性(石蕊试纸实验)。再加3mL盐酸(6mol／L)，然后依次用40mL、30mL、30mL纯乙醚，用旋转方法小心提取。每次摇动不少于5min。待静置分层后，将提取液移至另一个250ml，分液漏斗中(3次提取的乙醚层均放入这一分液漏斗中)。用蒸馏水洗涤乙醚提取液，每次10mL，直至最后的洗液不呈酸性(石蕊试纸实验)为止。

将此乙醚提取液置于锥形瓶中。于40～45℃水浴上回收乙醚。待乙醚只剩下少量时，停止回收，以风扇吹干剩余的乙醚。

3．滴定

于提取液中加入30ml。中性醇醚混合液，10mL蒸馏水，酚酞指示剂3滴，以O.05 mol／L氢氧化钠标准溶液滴至微红色为止。

(四)结果计算

样品中苯甲酸钠的含量按以下公式进行计算。

X=V*c*M*2.5/m*1000

式中：X——样品中苯甲酸(或苯甲酸钠)的含量，mg／kg；

V——滴定时所耗氢氧化钠标准溶液的体积，ml，；

c——氢氧化钠标准溶液的浓度，mol／L；

M一苯甲酸的摩尔质量(或苯甲酸钠的摩尔质量)，g／mol；

m——样品的质量，g。