1 范围

GB/T 18932的本部分规定了蜂蜜中四环素族抗生素残留量酶联免疫测定方法。

本部分适用于蜂蜜中四环素族抗生素残留量的测定。

本部分的方法检出限：四环素族抗生素为15.00ug/kg。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过GB/T 18932的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。

GB/T 6379测试方法的精密度通过实验室间试验确定标准测试方法的重现性和再现性(GB/T 6379-1986,neq ISO 5725:1981)

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T 6682-1992,neq ISO 3696:1987)

GB/T 18932.23蜂蜜中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定方法液相色谱-串联质谱法

3 原理

试样中残留的四环素族抗生素与微孔板中结合的四环素族抗生素共同竞争四环素族抗生素抗体，在酶标记物的作用下，形成的酶标记抗原抗体复合物与显色剂发生反应，用酶标仪测定吸光度，根据吸光度值得出试样中四环素族抗生素的含量。

4 试剂和材料

4.1 四环素族抗生素试剂盒：

4.1.1 96孔板：12条×8孔。

4.1.2 四环素族抗生素标准溶液。

4.1.3 四环素族抗生素抗体溶液。

4.1.4 四环素族抗生素酶标记物溶液。

4.1.5 基质。

4.1.6 显色剂。

4.1.7 反应停止液。

4.2 磷酸二氢钠(Na₂H₂PO₄·2H₂O)：优级纯。

4.3 磷酸氢二钠(Na₂HPO₄·12H₂O)：优级纯。

4.4 氯化钠：优级纯。

4.5 吐温20：分析纯。

4.6 磷酸盐缓冲溶液：pH=7.4。分别称取0.62g磷酸二氢钠(4.2)、5.73g磷酸氢二钠(4.3)和9g氯化钠(4.4)于1000 mL中，在pH计上调节溶液pH=7.4。

4.7 洗板溶液：pH=7.2～7.4。分别称取0.62g磷酸二氢钠(4.2)、5.73g磷酸氢二钠(4.3)和9g氯化钠(4.4)于1000mL中，再加1 mL吐温(4.5)，在pH计上调节溶液pH=7.2～7.4。

4.8 四环素族抗生素基质标准工作溶液：根据四环素族抗生素试剂盒(4.1)的线性范围，用空白蜂蜜样品提取液将四环素族抗生素标准溶液(4.1.2)按1：9进行稀释成不同浓度(ug/kg)的标准工作溶液。每次测定用的标准工作溶液均应现配现用。

4.9 水：GB/T 6682规定的一级水。

5 仪器

5.1 酶标仪。

5.2 8道移液器：50 uL～300uL。

5.3 单道移液器：5 uL～50 uL,100 uL～1000 uL和2 mL～10 mL。

5.4 液体混匀器。

5.5 超声波水浴。

5.6 注射过滤器：2 mL～5 mL，并带有孔径为0.45 um的水相针头式过滤膜。

5.7 具塞试管:10mL,50mL。

5.8 pH计：测量精度±0.02。

6 试样的制备与保存

6.1 试样的制备

对无结晶的实验室样品，将其搅拌均匀。对有结晶的实验室样品，在密闭的情况下，置于不超过60℃的水浴中温热、振荡，待样品全部融化后搅匀，冷却至室温，分出0.5kg作为试样。制备好的试样置于样品瓶中，密封，并加以标识。

6.2 试样的保存

将样品于室温下保存。

相关链接：酶联免疫法测定蜂蜜中泰乐菌素残留量（二）

文章来源：《常用兽药残留量检测方法》

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