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昆布二糖(laminaribiose)是β-1,3糖苷键连接的还原性二糖,是一种功能多样的高价值寡糖。它可以作为合成透明质酸的前体物质应用于制药及化妆品行业,作为促发芽剂和天然防腐剂应用于农业领域,且其具有益生作用,可以作为食品添加剂应用于食品保健品行业,另外,还可以调控嗜热菌热纤维梭菌的蛋白表达。昆布二糖的传统制备方法是以稀酸水解天然产物,但天然产物供应有限,导致昆布二糖价格居高不下。因此,开发成本低廉、环境友好的昆布二糖高效合成技术,对高附加值功能性寡糖生物制备具有重要意义。
中国科学院天津工业生物技术研究所研究员游淳带领的体外合成生物学中心研究团队,设计了将廉价底物淀粉和葡萄糖一步转化为昆布二糖的体外多酶催化系统。该体系包括α-葡聚糖磷酸化酶(α-glucan phosphorylase, αGP)和昆布二糖磷酸化酶(laminaribiose phosphorylase, LBP),其中αGP将淀粉转化成高能磷酸化糖(葡萄糖1-磷酸,G1P),LBP将葡萄糖和G1P催化合成昆布二糖;此外,添加异淀粉酶(isoamylase,IA)和4-葡聚糖转移酶(4-glucanotransferase,4GT)两个辅助酶可以提高昆布二糖产率;最终通过反应体系优化,基于淀粉的昆布二糖的产率进一步提高至91.9%。为验证该反应路径的工业潜力,该研究团队提高了底物淀粉和葡萄糖的浓度,最终可以得到61.2 g/L昆布二糖。这条新的酶法制备二糖系统可以成为未来二糖的生产平台,通过替换糖苷磷酸化酶可以合成不同二糖,为以淀粉为底物生产其他二糖奠定了基础。
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