2．检测限和定量限 检测限是指试样中被测物能被检测出的最低量或最低浓度，定量限度是指试样中被测物能被定量测定的最低量或最低浓度。HPLC法有关物质检测中，常用信噪比法计算检测限和定量限，检测限通常是信噪比为2～3的进样浓度或进样量，最低定量限的信噪比应为10的进样浓度或进样量。通常是在同一张色谱图中，选取比较平滑的一段基线计算噪音水平，如此，可能因为基线选取段的不一样导致检测限(定量限)产生较大差异，可采用随行空白的方法进行信噪比的计算。《中国药典》2015年版通则9101明确应把已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，以目标峰出峰时间附近空白色谱图中的噪音进行计算。ICH于1996年在分析方法验证指导原则中规定了基于响应值的标准偏差和标准曲线斜率计算检测限与定量限的方法，随后USP与EP均收录了该方法，《中国药典》2015年版通则9101中首次收录了该方法，按照LOD=3.3δ/S(LOQ=10δ/S)公式计算，其中δ为响应值的偏差，S为标准曲线的斜率，较为简便的方法是采用对照品或已知含量的样品在低浓度范围内制备系列浓度的线性溶液，按分析步骤进行测量，绘制浓度-峰面积线性回归曲线计算检测限与定量限，以某品种为例(表14-6);

表14-6 基于响应值的标准偏差和标准曲线斜率计算检测限与定量限示例

通常情况下，信噪比法依然是应用最广泛的方法。

一般情况下药品质量标准中单个杂质的含量限度为0.1％～0.5%。因此，应该使测定方法达到其定量限和检测限的条件下进行测定，如果没有杂质对照品就要配制0.1％的自身对照溶液进样，考察色谱系统是否能够检出或定量。在建立方法的时候要根据检测限或定量限，制定合适的样品溶液浓度和进样体积。虽然可以最简单地通过提高进样浓度和进样体积的方法改善检测限和定量限，但前提条件是不能超过色谱柱的载样量，还要考虑色谱柱的使用寿命，也可以通过调整检测波长的方式，采用杂质的最大吸收波长进行检测。

早期国内药品标准中常有“调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的xx%”这样的描述，但该方法是针对早期没有色谱工作站只能用记录仪采集信号的老式色谱仪进行的规定。随着科技的发展，现在所有高效液相色谱仪都配备有色谱工作站，对采集到的信号都可以随意放大，该规定已不能满足对药品质量控制的需求。《中国药典》2015年版对此做出了改变，不再有此类描述。目前，通用的方法是在有关物质检查中采用灵敏度溶液，如配制相当于定量限浓度的对照品溶液(或供试品溶液)进样检测，主峰的信噪比不小于10，《中国药典》2015年版二部中已超过100个品种的有关物质检查中采用灵敏度试验溶液对灵敏度进行规定。

相关链接：HPLC有关物质检测方法学验证中需要注意的问题（一）

文章来源：《实用化学药品检验检测技术指南》

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