溶液颜色检查法

(一)概述

溶液颜色检查法是间接控制药品中的有色杂质含量的方法。药物溶液的颜色能在一定程度上反映药物的纯度。药品的颜色通常来源于3个方面：

1．药物本身。有颜色的药物其分子结构中一般具有不饱和碳链或不饱和碳环的共扼体系，其颜色深浅与N、S、O等原子的种类及数目相关。

2．制备工艺中有色杂质的引入。

3．药物本身不稳定，在贮存期间由于氧化、水解、络合、聚合等原因生成有色杂质，使药物的颜色产生变化。如维生素G、葡萄糖、β-内酰胺类抗生素、喹诺酮类等药物在光照或受热条件下均易产生出有色杂质，导致药品溶液，甚至药品固体的外观颜色产生变化。

因此，药品溶液的颜色可间接表征药品的内在质量，反映药品的纯度。溶液的颜色检查可用来简易、直观、快速、粗略地监控药品中有色杂质含量的变化，是对通常利用紫外检测器进行有关物质测定的高效液相色谱法的一种有效补充，两者从不同的角度控制药品质量，不能相互替代。

(二)检查法

1．第一法本法为目视比色法结合色差计法。该法为溶液颜色检查的首选与常用方法，其优点是人机优势互补，检验没有困难或没有争议时就用简便、快速、直观、检测成本低的人工目视比色法进行。但人工目视法的主观误差大，易受观察光线条件及检验者的心理、生理等影响，且检查结果只能粗略估计，不能进行精确量化的测定和表达，特别是当供试品管呈现的颜色与对照品管的颜色深浅非常接近或色调不一致时，目视基本无法判定；另外，人眼在深色区(通常指标准液7号以上)对于颜色变化的灵敏度会明显低于浅色区(通常指标准液3号以下)。因此，药典规定在上述目视无法判定时应改用色差计进行复核确认。也就是说，目视比色法遇到困难或检验者之间对检验结果结论存在争议时，应改用色差计进行复核，这个仪器确认的步骤属于第一法的一部分。

(1)标准比色液：《中国药典》2015年版使用的标准比色液由比色用重铬酸钾液(黄色)、比色用硫酸铜液(蓝色)和比色用氯化钴液(红色)3种原色溶液按规定比例配制成黄绿色、黄色、橙黄色、橙红色和棕红色5种色调的贮备液，增加了“绿黄色”标准比色液，再按规定配制成0.5～10号的各色调标准比色液，共计66种。该系列标准比色液能满足大多数药品及其制剂的溶液颜色检查，但在实际检验中仍会遇到供试品溶液与标准比色液色调不一致的问题。因此，有些品种仍需要专门摸索制订专用对照比色液，如烟酸、葡萄糖等。

各国药典所用的标准比色液从色调到色号各不相同，其中《英国药典》《欧洲药典》和《美国药典》的比色用三原色液一致，均为红(氯化钴)、黄(氯化铁)、蓝(硫酸铜)3种色调，制备方法也一致。《英国药典》虽然也是5种色调，但却是棕色、棕黄色、黄色、绿黄色和红色，每种色调7～9个色号不等；《美国药典》的标准比色液共分A～T 20个色级，色调各有差异，且不按深浅排列。因此，国外药品颜色标准与国内颜色标准间难以用目视法进行直接比较。

(2)注意事项：目视比色法操作中应注意：①遵守供试品管与对照液管平行配对的原则，选择纳氏比色管要求玻质色泽、刻度标线高度应一致；②比色管应洁净、千燥，洗涤时不能用硬物洗刷，应用铬酸洗液浸泡，然后冲洗，避免表面粗糙；③供试品溶液的色泽较浅时宜采用在白色背景上自上而下透视的观察方式，色泽较深时则宜采用在白色背景前平视观察；④白色背景要求不反光，一般用白纸或白布；⑤检查时光线应明亮，光强度应能保证使各相邻色号的标准比色液清晰分辨。

(3)比色用硫酸铜液的配制：比色用硫酸铜液的配制采用氧化还原间接碘量法测定其含量。其含量计算公式如下：

式中，m为硫代硫酸钠滴定液的浓度(mol/L) ; V为硫代硫酸钠滴定液的体积(ml)。

本法基于铜盐(Ⅱ)在醋酸酸性溶液中将碘离子氧化生成碘，并生成碘化亚铜沉淀。以硫代硫酸钠滴定液滴定生成的碘，根据消耗滴定液的体积计算配制的溶液中硫酸铜的含量。化学反应方程式如下：

2Cu²⁺+4I^-→2Cu1↓+I₂

I₂+2S₂O₃^2-→2I^-＋S₄O₆^2-

为防止铜盐水解，故用盐酸(1→40)为溶剂。反应中有碘化亚铜沉淀产生，滴定中应充分振摇。本法操作简便，准确可靠。

(4)比色用氯化钴溶液的配制：比色用氯化钴溶液的配制采用络合滴定法测定其含量：其含量计算公式如下：

式中，M为乙二胺四醋酸二钠滴定液的浓度(mol/L) ; V为乙二胺四醋酸二钠滴定液的体积(ml)。

本法基于亚钴(Ⅱ)盐在pH 6.0的醋酸-醋酸钠缓冲液中与乙二胺四醋酸二钠反应生成稳定的配位化合物。亚钴盐与二甲酚橙的配位化合物的稳定常数小于亚钴盐与乙二胺四醋酸二钠的配位化合物，故以二甲酚橙为指示剂。加热至60℃对反应有促进作用。

为防止亚钴盐水解，故采用盐酸(1→40)为溶剂。本法操作简便，终点突跃明显，准确度与精密度均很好。

2．第二法本法为分光光度法，是通过使用分光光度仪在可见光区的某一固定波长处测定药品溶液的吸光度值，从而间接测定溶液的颜色。但由于在单一波长处的吸光度值不能完全反映药品颜色的全部特征，如色品、色调差异等，且其吸光度值随溶液颜色变化而变化的灵敏度通常也不如色差值高，故此法一般用于检查药品中某种已知特定的有色杂质。测定要求与注意事项同紫外-可见分光光度法。

5种色调贮备液及标准比色液在可见光区的吸收光谱曲线见图9-1。

图9-1 比色标准贮备液的吸收光谱

1．黄绿色；2．黄色；3.橙黄色；4.橙红色；5．棕红色

3．第三法本法为色差计法，是使用色差计直接测定药品溶液的透射三刺激值，对其颜色进行定量表述和分析的方法。

色差计由照明、探测及读数处理系统三大部分所组成。照明系统多为白炽光源，也有用微型脉冲氘灯的；探测器多为硒(硅)光电池、硅光电二极管或光电管，并配以拟合人眼色觉特性的滤光器；其输出结果除三刺激值外，还有根据CIE(国际照明委员会)表色系统自动计算而得的各种色度学参数(可根据需要进行选定)。色差计在使用前应根据中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局颁布的测色色差计检定规程JJG595-2002的规定进行检定。仪器首先应符合照度条件，它决定着仪器测色准确度的高低。为减少测色误差，仪器一般配备有专用工作白板、色板或其他基准物质以校正仪器，检定项目除准确度外，还有重复性等。

《美国药典》从1980年版起率先收载了该方法，但仅就一般性原理进行了描述，没有详细的操作和判定方法。其他一些国家的药品企业标准中也早有使用类似的仪器、方法来测定药品溶液的颜色，但均尚未收载进药典。

色差计测定的误差一般来自于光源的变化、测定温度的变化、测定池的洁净度与配对匹配性等。测定时应注意：

(1)测定池应洁净透明，可用洗液浸泡清洗。

(2)水的三刺激值为X=94.81,Y=100.00,Z=107.32。如果测定后水的三刺激值中的任一值与标准值的偏差＞1.5，则应重新校准仪器。

(3)供试品溶液配制后应立即测定，如溶液中含有气泡，可短时超声去除后再进行测定。

(4)除自带恒温系统的仪器外，应注意测定期间环境与仪器自身的温度应保持恒定。

(5)本法只适用于测定澄清溶液的颜色，如供试品溶液浑浊，则影响颜色测定的结果，甚至不能测定。

相关链接：药品易炭化物检查

文章来源：《实用化学药品检验检测技术指南》

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