鉴别试验是以所采用的化学反应或物理特性产生的明显的易于觉察的特征变化为依据。因此，能影响鉴别试验判定结果的特征变化的因素都是应当精心选择和严格控制的。也就是说鉴别试验必须在规定条件下完成，否则将会影响结果的判断。常见的影响因素包括被测物的浓度、试剂的用量、溶液的温度、溶液的pH、反应时间、共存的干扰物质等。为了保证试验结果的真实、可靠，试验中应注意以下几点：

一、控制适合反应进行的条件

1.溶液的浓度主要指被鉴别药物的浓度，但在鉴别试验时也不能忽视所用各种试剂的浓度。由于一般鉴别试验多采用观测沉淀、颜色的变化来判定结果，而药物和有关试剂的浓度会直接影响上述的各种变化，必须严格规定。供试品和供试液的取用量应按各品种项下的规定。

试验前，固体供试品应研成细粉；液体供试品如果太稀可浓缩，如果太浓可稀释，以获得明显的反应现象。

2．溶液的温度试验温度对化学反应的影响很大，一般温度每上升10℃，可使反应速度增加2～4倍，应按各试验项下规定的温度进行试验。如达不到时，可适当加温。

试验在试管或离心管中进行，如需加热，应小心仔细，并使用试管夹，边加热边振摇，试管口不要对着试验操作者。试验中需要蒸发时，应置于玻璃蒸发皿或瓷蒸发皿中，在水浴上进行。

3．溶液的酸碱度许多鉴别反应都需要在一定酸碱度的条件下才能进行。溶液酸碱度的作用在于能使各反应物有足够的浓度处于反应活化状态，使反应生成物处于稳定和易于观测的状态。

4. 干扰成分的存在在鉴别试验中，如药物结构中的其他部分或药物制剂中的其他组分也可参加鉴别反应，产生干扰鉴别试验结果的现象，就会混淆试验结果。这时必须选择专属性更高的鉴别反应将其消除或将其分离。

5．试验时间有机化合物的化学反应和无机化合物不同，一般反应速度较慢，达到预期试验结果需要较长的时间。这是因为有机化合物是以共价键相结合的，化学反应能否进行，依赖于共价键的断裂和新价键形成的难易，这些价键的更替需要一定的反应时间和条件。同时在化学反应过程中，有时存在着许多中间阶段，甚至需要加入催化剂才能启动反应。因此，使鉴别试验完成需要一定时间。

6．沉淀反应有色沉淀反应宜在白色点滴板上进行，白色沉淀反应应在黑色或蓝色点滴板上进行，也可在试管或离心管中进行；如沉淀少不易观察时，可加入适量的某种与水互不混溶的有机溶剂，使原来悬浮在水中的沉淀集中于两液层之间，以便观察。试验中需要分离沉淀时，应采用离心机分离，经离心沉降后，用吸出法或倾斜法分离沉淀。

7.其他注意事项试验中试药和试液的加入量、方法和顺序均应按各试验项下的规定；如未做规定，试液应逐滴加入，边加边振摇；并注意观察反应现象。

颜色反应须在玻璃试管中进行，井注意观察颜色的变化。试验中试药和试液的加入量、方法和顺序均应按各试验项下的规定；如未做规定，试液应逐滴加入，边加边振摇；并注意观察反应现象。

二、提高反应的灵敏性

鉴别试验是以灵敏的专属反应为依据，在合适的条件下进行试验判定的。如果选用的鉴别反应的灵敏度越高，则产生可被观测的结果所需要的药物就越少。

1．反应的灵敏度和空白试验在一定的条件下，能在尽可能稀的溶液中观测出尽可能少量的供试品，反应对这一要求所能满足的程度即称为反应的灵敏度(sensitivity)。它以两个相互有关的量，即最低检出量(又称检出限量)和最低检出浓度(又称界限浓度)来表示。

反应灵敏度很高的试验，必须保证试剂的纯度和仪器的洁净，同时应进行空白试验，以供对照。空白试验就是在与供试品鉴别试验完全相同的条件下，除不加供试品外，其他试剂均同样加入而进行的试验。

2．提高反应灵敏度的方法在实际工作中，常采用以下措施来提高反应的灵敏度。

(1)加入与水互不相溶的有机溶剂提取浓集：在鉴别试验中，如生成物具有颜色并颜色很浅时，可利用加入少量与水互不相溶的有机溶剂，浓集有色生成物，使有机溶剂中的颜色变深，易于观测。

(2)改进观测方法：例如将目视观测溶液的颜色改为可见分光光度法；将观测生成沉淀改为比浊度法等。

(3)其他方法：反应不够灵敏、实验条件不易掌握的试验，可用对照品进行对照试验。

一般鉴别试验中列有1项以上的试验方法时，除正文中已明确规定外，应逐项进行试验，方能证实，不得任选其中之一作为依据。

相关链接：药物的鉴别方法

文章来源：《实用化学药品检验检测技术指南》

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