三、食品中环己基氨基磺酸钠检验

环己基氨基磺酸钠，又名甜蜜素(sodium cyclamate)，甜度为蔗糖的40～50倍，是一种人工合成的非营养型甜味剂，为白色针状、片状结晶或结晶状粉末，无臭，溶于水，几乎不溶于乙醇等有机溶剂。对热、酸、碱稳定。环己基氨基磺酸钠对动物的急性毒性作用较低，FAO/WHO食品添加剂委员会规定环己基氨基磺酸钠的ADI值为0～11mg/kg。环己基氨基磺酸钠的结构式为：

我国《食品添加剂使用标准》(GB 2760)中规定，环己基氨基磺酸钠用于冷冻饮品、水果罐头、腌渍的蔬菜、腐乳类、面包、糕点、饼干、复合调味品、饮料类、配制酒等的最大使用量为0.658/kg；果酱、蜜饯凉果中最大使用量为1.0g/kg；凉果类、果丹(饼)类等最大使用量为8.0g/kg。

食品中甜蜜素的常用测定方法有气相色谱法、分光光度法、薄层色谱法、离子色谱法、高效液相色谱法等，其中前三种方法为国家标准检验方法(GB/T 5009.97)。气相色谱法和分光光度法适用于饮料、凉果等食品中甜蜜素的测定，而薄层色谱法适用于饮料、果汁、果酱、糕点中甜蜜素的测定。

(一)气相色谱法

1．原理环己基氨基磺酸钠在硫酸介质中与亚硝酸反应，生成环己醇业硝酸酯，利用气相色谱法进行检测，根据保留时间定性、峰面积标准曲线法定量。反应方程式如下：

2．分析步骤

(1)样品处理：①液体试样：如样品中含有二氧化碳，先加热除去；如样品中含有乙醇，先加氢氧化钠溶液使其呈碱性，在沸水浴中加热除去。再取适量样品置于冰浴中。②固体试样：样品加少许层析硅胶(或海砂)在研钵中研磨、混匀，加水定容后，过滤，再取适量样液置于冰浴中，加入亚硝酸钠和硫酸溶液，摇匀，然后加入正己烷和氯化钠，混匀后静止分层，取正己烷层，离心待分析。标准溶液同样品处理步骤。

(2)测定：色谱参考条件为不锈钢色谱柱(2m×3mm)，固定相：涂以10%SE-30的Chromosorb W AW DMCS (80～100目)；柱温:80℃；气化温度：150℃；检测室温度：150℃；氮气流速：40ml/min。

3．方法说明本方法的最低检出量为3～4ug。酯化反应需在低温下进行，所以要在冰浴中进行操作。

(二)分光光度法

1．原理环己基氨基磺酸钠在硫酸介质中与亚硝酸反应，生成环己醇亚硝酸酯，与磺胺重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合生成红色染料，在550nm波长下测定吸光度值，与标准比较定量。

2．分析步骤

(1)样品处理：①液体试样：试样置于透析纸中，透析；②固体试样：样品加少许层析硅胶(或海砂)在研钵中研磨、混匀，加水定容后，过滤，准确吸取适量样液，置于透析纸中透析。

(2)测定：①分别吸取透析液和标准溶液，在冰浴中加入亚硝酸钠和硫酸溶液，摇匀后置于冰水中1小时，取出后加入三氯甲烷，混匀，静置分层，弃上层液，三氯甲烷层依次用水、尿素-盐酸溶液、水洗涤。准确取三氯甲烷层用于测定；②向各管中加入甲醇、磺胺，置于冰水中，取出至常温后加入盐酸萘乙二胺溶液和甲醇，于550nm波长处测定标准溶液和样液的吸光度值，用三氯甲烷作参比；③分别取水和透析液，除不加亚硝酸钠外，其他操作同样品处理液，测定试剂和样液空白的吸光度值，计算样品中环己基氨基磺酸钠的含量。

3．方法说明本方法的最低检出量为3～4ug；重氮反应需在低温下进行，因此，要用冰浴，而偶合反应则需在常温下进行；环己醇亚硝酸酯溶于三氯甲烷，加入水、尿素-盐酸溶液洗涤，可去除水溶性杂质。

(三)薄层色谱法

1．原理样品经酸化后，用乙醚提取，浓缩，点样于聚酰胺薄层板上，展开，经显色后，根据薄层板上环己基氨基磺酸钠的比移值及显色斑深浅，与标准比较进行定性、半定量分析。

2．分析步骤

(1)样品处理：①饮料、果酱：样品(汽水需加热去除二氧化碳)加氯化钠至饱和，盐酸酸化；②糕点：样品研碎，用石油醚提取3次，挥干溶剂后，加入盐酸酸化，再加入氯化钠饱和。将上述处理的样品用乙醚提取，并经无水硫酸钠脱水后，挥干乙醚，用无水乙醇溶解残渣，备用。

(2)测定：用微量注射器将样品处理液和环己基氨基磺酸标准溶液分别点在聚酸胺薄层板下端，用正丁醇-浓氨水-无水乙醇(20+1+1)作展开剂，展开，取出挥干，用溴甲酚紫溶液显色，斑点呈黄色，背景为蓝色。与标准溶液斑点的比移值和颜色进行比较，确定样品中环己基氨基磺酸的含量。

3．方法说明环己基氨基磺酸标准溶液要临用现配。本方法可同时测定苯甲酸、山梨酸、糖精等成分。也可用异丙醇-浓氨水-无水乙醇(20+1+1)作展开剂。

四、食品中阿斯巴甜检验

阿斯巴甜(aspartame )，又名甜味素，为白色结晶性的粉末，对酸、碱、热的稳定性较差，甜味高，热量较低。阿斯巴甜对动物的急性毒性作用较低，小鼠经口LD₅₀为2.2g/kg, FAO/WHO食品添加剂委员会规定阿斯巴甜的ADI值定为0～40mg/kg。阿斯巴甜的结构式为：。

我国《食品添加剂使用标准》中规定，阿斯巴甜为可在各类食品中按生产需要适量使用的食品添加剂，添加阿斯巴甜的食品应标明“阿斯巴甜(含苯丙氨酸)”。食品中阿斯巴甜检测的常用方法为高效液相色谱法(GBff 22254)。

1．原理利用阿斯巴甜易溶于水和乙醇的特点，样品经处理后，采用高效液相色谱分析。经反相C₁₈色谱柱分离后，于208nm波长下测定，根据保留时间定性，峰面积标准曲线法定量。

2．分析步骤

(1)样品处理：①碳酸饮料类：样品加热除去二氧化碳，蒸馏水定容，离心，上清液经滤膜过滤备用；②乳饮料类：样品中加入乙醇，离心，取上清液，沉淀用乙醇-水(2+1)洗涤，离心合并上清液，定容，滤膜过滤备用；③浓缩果汁类：样品加蒸馏水定容，离心，取上清液，经滤膜过滤备用；④固体饮料类：样品加入蒸馏水，超声振荡提取，定容，离心，取上清液，经滤膜过滤备用。

(2)测定：色谱参考条件为C₁₈色谱柱(150mm×4.6mm, 5um)；流动相：甲醇-水(39+61);流速：0.8ml/min；二极管阵列检测器，波长208nm。

3．方法说明当样品量为5g,定容为25ml、进样量20ul时，方法的检出限为0.002g/kg;本方法适用于碳酸饮料、乳饮料、浓缩果汁和固体饮料中阿斯巴甜的检测。

相关链接：食品中甜味剂检验（一）

文章来源：《食品理化检验》

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