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毛细管电泳的分离模式

发布时间:2018-11-15 00:00 作者:中国标准物质网 阅读量:3228

目前,毛细管电泳有六种分离模式:毛细管区电泳、胶束电动毛细管色谱、毛细管凝胶电泳、毛细管等电聚焦电泳、毛细管等速电泳和毛细管电色谱。

13.2.2.1毛细管区带电泳

毛细管区带电泳(CZE)是毛细管电泳中最简单、最基本也是应用最广的一种分离模式,是其他分离模式的基础。CZE可以分离小分子,也可以分蛋白质、钛、糖等生物大分子;毛细管经过改性处理之后,甚至可以分离阴离子。CZE所采用的背景电解质是缓冲溶液,分离是基于试样中各个组分间荷质比的差异,依靠试样中的不同离子组分在外加电场作用下电泳淌度的不同而实现分离,有时需在缓冲溶液中加入一定的添加剂,以提高分离选择性,改变电渗流的大小和方向,或抑制毛细管壁的吸附等。CZE模式下,电中性物质的淌度差为零,所以不用于分离中性物质。

13.2.2.2胶束电动毛细管色谱

胶束电动毛细管色谱法(MECC或者MEKC)是将电泳技术和色谱技术很好地结合在一起的一种分离模式,以胶束为准固定相,是毛细管电泳中既能够分离带电组分又能够分离中性化合物的分离模式,大大拓宽了电泳技术的应用范围。在背景电解质中加入超过临界胶束浓度的表面活性剂使之在溶液中形成胶束(疏水端聚集在一起,带电荷端向外,胶束在溶液中构成独立的相),比如十二烷基硫酸钠,当溶液中表面活性剂浓度超过临界胶束浓度时,它们就会聚集形成具有.三维结构的胶束,疏水性烷基聚在一起指向胶束中心,带电荷的一端朝向缓冲溶液。在电泳中,这些胶束按其所带电荷的不同朝着与EOF相同或相反的方向迁移,作为一种“准固定相”,使试样组分中的中性粒子在随电渗流移动时,能够像色谱分离一样,在电解质溶液和“准固定相”,两相间进行多次分配,依据其分配行为的不同而获得分离。在胶束电动毛细管色谱模式下,“准固定相”作为独立相对分离有重要作用。分离选择性会随着准固定相的种类的改变而改变。

由于毛细管电泳分离及其检测等方面的限制,在实际工作中可选的表面活性剂数量相当少,目前比较常用的几种表面活性剂有:十二烷基硫酸钠十二烷基磺酸钠、十二烷基三(甲基)氯化铵、十二烷基三(甲基)溴化铵、十四烷基硫酸钠、十四烷基三(甲基)溴化铵、癸烷磺酸钠等阴离子表面活性剂;十六烷基三(甲基)溴化铵等阳离子表面活性剂;胆酰胺丙基二(甲基)氨基丙磺酸、胆酰胺丙基二(甲基)氨基-2-基丙磺酸等两性离子表面活性剂等。

13.2.2.3毛细管凝胶电泳

毛细管凝胶电泳(GGE)是各种分离模式中柱效最高的一种分离模式(n>107块/m),它用凝胶物质或者其他筛分介质作为支撑物进行分离的区带电泳。由于毛细管内填充有凝胶,试样组分在分离中不仅受电场力的作用,同时还受到凝胶的尺寸排阻效应的作用,使得毛细管凝胶电泳结合了毛细管电泳和平板凝胶电泳的特点,常用于蛋白质核糖核酸、DNA片段的分离和分析。

13.2.2.4毛细管等电聚焦电泳

毛细管等电聚焦电泳(LIEF)是根据试样组分的等电点不同而实现分离的一种分离分析技术。当使用有涂层的毛细管时,可以使电渗流降至很小,从而实现基于电迁移差异的分离。将样品与两性电解质混合,然后装入毛细管;施加高电压3~4 min,两性电解质沿毛细管形成线性pH梯度,各种具有不同等电点的样品组分按照这一梯度迁移到其等电点位置,其所带净电荷为零,在电场中不再移动,这样各组分被分别聚焦在柱内非常窄的聚焦区带。聚焦完成后,通过外力将此梯度溶液推出毛细管,这些聚焦谱带就被“电洗脱”使组分逐个通过检测器。

等电聚焦常用来测定蛋白质的等电点,对变异血红蛋白、免疫球蛋白等的测定非常有效。在异构酶鉴定、多克隆抗体、单克隆抗体等研究中也经常使用。

13.2.2.5毛细管等速电泳

毛细管等速聚焦电泳(CITP)是依据在被分离组分与电解质一起向前移动时电泳淌度不同,进行聚焦分离的电泳方法。同等电聚焦电泳一样,等速聚焦电泳在毛细管中的电渗流为零,缓冲液系统由前后两种不同淌度的电解质组成。在分离时,毛细管内首先导入前导电解质,其电泳淌度要高于各被分离组分,含有比所有组分电泳淌度都大的前导离子;然后进样,随后再导入尾随电解质,含有比所有组分电泳淌度都小的尾随离子。在强电场作用下,各被分离组分在前导电解质与尾随电解质之间的空隙中发生聚焦分离。当达到电泳稳定时,各组分按照其淌度大小一次排列,并都以前导离子相同的速率移动,因此称为等速电泳。

13.2.2.6毛细管电色谱

毛细管电色谱(CEC)在色谱分离机制的基础上,进行分离的电泳技术,它为了使被分离组分在固定相载体上进行保留和分配,在毛细管中填充了类似于液相色谱用的固定相载体,它与液相色谱法的区别在于用电场驱动溶液流动。

文章来源:《分析化学分析方法的原理及应用研究》

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