第四，TriSep^TM 2100LIF激光诱导荧光检测器的应用实例：激光诱导荧光检测器作为一种新型高灵敏度的检测器得到了广泛的应用，尤其是在测定生物体中超痕量生物活性物质和环境中有机污染物方面。与现有的其他检测方式相比，激光诱导荧光检测器具有最高的灵敏度，特别适用于对微生物、蛋白质、核酸以及有机小分子的痕量分析，在生物化学、分子生物学、神经化学、免疫学、药物学、环境科学、毒理学、食品学等学科有着广泛的应用前景。

a．细胞破碎物中DOX分析。Doxorubicin(DOX)，DOX的分子式为C₂₇H₂₉NO₁₁，目前临床上多用其盐酸盐作为各类恶性肿瘤的化疗药物，如白血病和乳腺癌，其作用机制主要是多柔比星分子进入细胞核固定在拓扑异构酶Ⅱa-DNA复合体上影响细胞增殖。其分子结构式为

临床结果显示，许多肿瘤患者在经历了数次有效的化疗后，最终难免复发，其主要原因是肿瘤细胞对化疗药物产生了耐药性。化疗药物进入细胞内诱使某些蛋白结构发生改变，产生的耐药机制使药物在细胞内有一定量的蓄积。目前，国内外已经建立了很多耐药细胞模型用于研究耐药性产生的机制及新药的筛选，但由于细胞内药物浓度极低，给检测带来一定的困难。目前多采用高效液相色谱配合荧光检测器进行检测，但此法进样量大、灵敏度低，因此对待测样品的量和浓度提出较高的要求，这对细胞内药物微含量的检测非常不利。采用离效、商灵敏度的pCEC-LIF技术，利用已经建立好的人乳腺癌细胞耐多柔比星（MCF-7/DOX)模型，对细胞内的多柔比星的含量进行分析检测，结果表明该法简便快速且精度很高。不同电压下的细胞内多柔比星的色谱分离图如图2-72所示。

图2-72 不同电压下的细胞内多柔比星的色谱分离图

不同电压下色谱分离的比较

分离电压：A-0kV，B-2kV

流动相：CH₃OH：ACN：0.01mol/L NH₄H₂PO₄：HAc=50：22：28：0；色谱柱：300mm×100um的3um的C18毛细管柱，有效长度200mm，反压：6.9MPa；检测器波长：激发473nm和发射520nm；进样：20nL

b.痕量氨基酸分析。

毛细管电泳分离-LIF检测FITC衍生的氨基酸如图2-73所示。

图2-73 毛细管电泳分离-LIF检测FITC衍生的氨基酸

样品：7×10^-9 M氨基酸；毛细管:100um×58cm(窗孔前44cm)

Buffer：10 mM borate；Inj ection：10kV，2s；Separation voltage：10kV

c．环境中痕量污染物脂肪胺分析。

图2-74 FITC衍生16种脂肪胺类化合物的加压毛细管电色谱分离图

毛细管柱：EP-100-20-3-C18

流动相：(A)64％(v/v)CH3CN/36％ 4mM Na₂HPO₄(pH=8)

(B)20％(v/v) CH3CN/80％4mM Na₂HPO₄(pH=8)

梯度条件：0～7min 0％A，7.1～12min 20％ A，12.1～16min 30％ A，16.1～20min 40％ A，20.1～30 50％ A，30.1～35min 100% A

压力：6.4MPa

分离电压：1kV

进样量:20nL

检测器：LIF

激发波长：473nm

发射波长：520nm

样品：1．甲胺；2.乙胺；3．正丙胺；4.2-氨基丁胺；5.正丁胺；6. 3-甲基-异丁胺；7．正戊胺；8．己胺；9．庚胺；10．正辛胺；11．正壬胺；12．正癸胺；13．正十一胺；14．正十二胺；15．正十三胺；16．正十四胺

相关链接：HPLC检测器的发展现状及其进展（一）