(3)四元溶剂梯度洗脱四元溶剂梯度洗脱图示，可用一个正四面体形式的图示表示，如图9-69所示。它的4个面分别为△ABC、△ACD、△ADB和△BCD。

仍以反相键合相色谱为例，以水作为流动相的主体，另选3种改性剂，如甲醇、乙腈和四氢呋喃，来改变流动相的组成，以调节流动相的极性和洗脱强度。

若以正四面体的顶点A表示流动相的主体水，其他三个顶点B、C、D分别表示加入的改性剂甲醇(MeOH )、乙腈(ACN)和四氢呋喃(THF)，则A、B、C、D4个顶点的组成和极性参数分别如下。

A点：H₂O  100％；P'_A＝10.2

B点：MeOH  100％；P'_B＝5.1

C点：ACN  100％；P'_c＝5.8

D点：THF  100％；P'_D＝4.0

图9-69四元溶剂梯度洗脱的图示

除4个顶点外，在正四面体6个棱边AB、AC、AD、BC、CD和DB上的每一点都代表一种二元混合溶剂，在4个三角形△ABC、△ACD、△ADB和△BCD面上的每一点(除去4个顶点)都代表一种三元混合溶剂。以△BCD面上的中心点K为例，来确定它的组成和极性参数。

K点：MeOH 33.3％，ACN 33.3％，THF 33.3％

P'_K=5.1×33.3％+5.8×33.3％+4.0×33.3％

＝1.70＋1.93+1.33=4.96

在正四面体3个棱边AB、AC和AD的中间点(50％)作一截面△EGI，其高度相当于由顶点A至底面△BCD的中心点K所作垂直线AK的50％，此垂直线AK的长度可作为梯度洗脱的时间坐标。△EGI的3个顶点E、G和I的组成和极性参数分别如下。

E点：H₂O 50％，MeOH 50％

P'_E＝10.2×50％＋5.1×50％＝5.1+2.55＝7.65

G点：H₂O 50％，ACN 50％

P'_G＝10.2×50％+5.8×50％＝5.1+2.9＝8.0

I点：H₂O 50％，THF 50％

P'_I＝10.2×50％＋4.0×50％＝5.1+2.0＝7.1

由△EGI各顶点的参数可计算出其中心点J点(位于AK垂线上)四元混合溶剂的组成和极性参数如下。

J点：H₂O 50％，MeOH 50％×33.3％＝16.7％

ACN 50％×33.3％＝16.7％，THF 50％×33.3％＝16.7％

P'_J＝10.2×50％+5.1×16.7％+5.8×16.7%+4.0×16.7％

＝5.10＋0.85＋0.97＋0.67＝7.59

在正四面体垂线的80％高度处，再作一截面△MNQ，此三角形3个顶点M、N和Q的组成和极性参数分别如下所示。

M点：H₂O 20％，MeOH 80％

P'_M＝10.2×20％＋5.1×80％＝2.04+4.08＝6.12

N点：H₂O 20％，ACN 80％

P'_N＝10.2×20％＋5.8×80％＝2.04+4.64＝6.68

Q点：H2O 20％，THF 80％

P'_Q＝10.2×20％+4.0×80％＝2.04+3.20＝5.24

由△MNQ各顶点的参数可计算出其中心点R点(位于AK垂线上)四元混合溶剂的组成和极性参数如下。

R点：H₂O 20％，MeOH 80％×33.3％＝26.6％

ACN80％×33.3％=26.6％，THF 80％×33.3％＝26.6％

P'_R＝10.2×20％+5.1×26.6％+5.8×26.6％+4.0×26.6％

＝2.04＋1.36＋1.55＋1.07＝6.02

如果以线性梯度进行四元梯度洗脱，即从图9-69中的A点开始计时，经过J点、R点，最后到达K点，总洗脱时间为t，则与此四点对应的四元混合溶剂的组成和极性参数如下所示。

在此四元溶剂梯度洗脱中，随洗脱时间的增加，四元混合溶剂流动相的极性参数逐渐减小，其洗脱强度逐渐增强。

由以上对二元、三元、四元梯度洗脱图示方法的简介可以看到梯度洗脱实验技术比较复杂。前面叙述涉及的相关计算及图示表达，都可以通过编制相应的计算机软件，由计算机控制的梯度洗脱单元来完成。