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在高效液相色谱分析中使用的色谱柱具有以下特征:
①固定相使用全多孔的、粒径2~10um的填料。
②色谱柱具有较小的内径(2~5mm),短的柱长(10~15cm)和高入口压力(10~100MPa)。
③色谱柱具有高柱效[理论塔板数达2×(104~105)块/m]。
对这种具有高分离性能的色谱柱,色谱柱的填充情况常用色谱柱的总孔率、柱压力降和柱渗透率来表征。
1.总孔率
总孔率指被固定相填充后的色谱柱在横截面上可供流动相通过的孔隙率,用εT表示
式中V—色谱柱的空体积,cm3;
L—柱长,cm;
F—流动相的体积流速,cm3/s;
u—流动相的线速度
r—柱内径(半径),cm;
tM—柱的死时间。
εT表达了色谱柱填料的多孔性能,当使用全多孔硅胶固定相时,εT约为0.85。使用非多孔的玻璃微珠固定相时,εT约为0.40,此值可认为是柱中颗粒之间的孔率,用ε表示。
2.柱压力降
柱压力降用△p表示。
式中,φ是色谱柱的阻抗因子;η是流动相的黏度;L是色谱柱长;u是流动相的线速度;dp是固定相颗粒直径;k0是色谱柱的比渗透系数。
k0与φ和ε有关:
3.柱渗透率
柱渗透率用KF表示
KF值大,表明柱阻力小,柱渗透性好,流动相易于通过色谱柱。
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