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分配色谱的全称是液液分配色谱。分配色谱是利用混合物的各个组分在两个互不相溶的溶剂中的分配系数不同而进行分离的一种色谱方法。
1.基本原理
分配色谱是将某种溶剂涂布在一种不起吸附作用的惰性固体物质上,这种固体物质称为载体,而溶剂称为固定相。例如,在硅胶上涂布一层水膜,将含有固定相的载体填充在色谱柱中,在柱顶端加入样品溶液,用与固定相不相溶的另一种溶剂来冲洗色谱柱,这种溶剂称为流动相,由于样品中各组分在固定相和流动相中的分配系数不同先后从色谱柱中流出而实现分离。
2.载体
吸附色谱中的吸附剂是分配色谱常用的载体,对载体的要求是:
①化学惰性。对流动相溶剂和被分析物质均不起作用,包括无吸附作用。
②多孔性。应有较大的表面积,且孔径分布要均匀。
③与固定相之间有较大的吸着力,以形成一层牢固的液膜。常用的载体有硅胶、纤维素、硅藻土等。
3. 固定相与流动相
固定相和流动相的选择是决定分配色谱分离好坏的主要因素,溶剂对的选择原则为如下:
①两相不能互溶。
②两相的极性应有较大的差异。
③样品在固定相中的溶解度应适当地大于其在流动相中的溶解度。
4.分配色谱溶剂系统的选择
根据两相的极性不同,分配色谱法可以分为两类—正相分配色谱法和反相分配色谱法。
正相分配色谱是指固定液有较大的极性(例如水或各种水溶液等),而流动相则为极性较弱的有机溶剂,载体可选用极性吸附剂如硅胶、硅藻土、纤维素等。
反相分配色谱是指固定相具有较小的极性(例如硅油、石蜡等),而流动相则为强极性溶剂,如水及亲水性溶剂。载体应选用非极性的高聚物微粒等。
分配色谱能适于各类化合物的分离。在分离亲水性和中等极性物质时,可选用水及各种酸、碱、盐、缓冲溶液作固定相,用烃、酮、酯、卤代烷、苯等弱极性溶剂作流动相。当分离中等及弱极性物质时,可选用亲水性有机溶剂(如甲醇、甲酰胺、乙二胺等)作固定相,用非极性溶剂作流动相。当分离亲脂性物质时,可用非极性溶剂作固定相,亲水性溶剂作流动相。文献上已总结了不少用于分配色谱的溶剂系统,需要时可查阅。
5.分配柱色谱操作和应用
分配柱色谱固定相多采用湿法装柱,装柱的溶剂一般用流动相,流动相应先用固定相饱和,以免洗脱过程中固定相流失。
分配柱色谱的操作与一般吸附柱色谱的操作基本相同,此处不再重复。
由于分配柱色谱速度较慢,处理样品量较少(决定于液膜厚度),因此其应用没有吸附柱色谱广泛。硅胶分配色谱主要用于一些水溶性较大的化合物的分离,如皂苷、糖类、酚类化合物等。
相关链接:吸附柱色谱法
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