1 范围

本标准规定了土壤中六六六和滴滴涕残留量的测定方法。

本标准适用于土壤样品中有机氯农药残留量的分析。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 17332-1998食品中有机氯和拟除虫菊酯类农药多种残留的测定。

NY/T 395农田土壤环境质量监测技术规范

3 原理

土壤样品中的六六六和滴滴涕农药残留量分析采用有机溶剂提取，经液-液分配及浓硫酸净化或柱层析净化除去干扰物质，用电子捕获检测器(ECD)检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量。

4 试剂与材料

4.1 载气：氮气(N₂)，纯度≥99.99％。

4.2 标准样品及土壤样品分析时使用的试剂和材料。所使用的试剂除另有规定外均系分析纯，水为蒸馏水。

4.2.1 农药标准品：

a-BHC、P-BHC、γ-BHC、δ-BHC、p,p'-DDE,o,p'-DDT,p,p'-DDD,p,p'-DDT,纯度为98.0％～99.0％。

4.2.1.1 农药标准溶液制备：准确称取(4.2.1)的每种100mg(准确到±0.0001g),溶于异辛烷或正己烷(β-BHC先用少量苯溶解)，在100mL容量瓶中定容至刻度，在冰箱中贮存。

4.2.1.2 农药标准中间溶液配制：用移液管量分别取8种农药标准溶液，移至100mL容量瓶中，用异辛烷或正己烷稀释至刻度，8种储备液的体积比为：Va-BHC:Vβ-BHC:Vγ-BHC:Vδ-BHC:Vp,p'-DDE:Vo,p'-DDT:Vp,p'-DDD:Vp,p'-DDT=1:1:3.5:1:3.5:5:3:8(适用于填充柱)。

4.2.1.3 农药标准工作溶液配制：根据检测器的灵敏度及线性要求，用石油醚或正己烷稀释中间标液，配制成几种浓度的标准工作溶液，在4℃下贮存。

4.2.2 异辛烷(C₈H₁₈)。

4.2.3 正己烷(C₆H₁₄):沸程67～69℃，重蒸。

4.2.4 石油醚：沸程60～90℃，重蒸。

4.2.5 丙酮(CH₃COCH₃)：重蒸。

4.2.6 苯(C₆H₆)：优级纯。

4.2.7 浓硫酸(H₂SO₄)：优级纯。

4.2.8 无水硫酸钠(Na₂SO₄)：在300℃烘箱中烘烤4h，放入干燥器备用。

4.2.9 硫酸钠溶液：20g/L。

4.2.10 硅藻土：试剂级。

5 仪器

5.1 脂肪提取器(索式提取器)。

5.2 旋转蒸发器。

5.3 振荡器。

5.4 水浴锅。

5.5 离心机。

5.6 玻璃器皿：样品瓶(玻璃磨口瓶)，300mL分液漏斗，300mL具塞锥形瓶；100mL量筒，250mL平底烧瓶，25mL, 50mL, 100mL容量瓶。

5.7 微量注射器。

5.8 气相色谱仪：带电子捕获检测器(⁶³Ni放射源)。

6 样品

6.1 样品性状

6.1.1 样品种类：土壤。

6.1.2 样品状态：固体。

6.1.3 样品的稳定性：在土壤样品中的六六六、滴滴涕化学性质稳定。

6.2 样品的采集与贮存方法

6.2.1 样品的采集：按照NY/T 395中有关规定采集土壤，采集后风干去杂物，研碎过60目筛，充分混匀，取500g装入样品瓶中备用。

6.2.2 样品的保存：土壤样品采集后应尽快分析，如暂不分析可保存在-18℃冷冻箱中。

7 分析步骤

7.1 提取

准确称取20.0g土壤置于小烧杯中，加蒸馏水2mL，硅藻土4g，充分混匀，无损地移入滤纸筒内，上部盖一片滤纸，将滤纸筒装入索式提取器中，加100mL石油醚-丙酮(1:1)，用30mL浸泡土样12h后在75～95℃恒温水浴锅上加热提取4h，每次回流4～6次，待冷却后，将提取液移入300mL的分液漏斗中，用10mL石油醚分三次冲洗提取器及烧瓶，将洗液并入分液漏斗中，加入100mL硫酸钠溶液，振荡lmin，静置分层后，弃去下层丙酮水溶液，留下石油醚提取液待净化。

7.2 净化

7.2.1 浓硫酸净化法(A法)：适用于土壤、生物样品。在分液漏斗中加入石油醚提取液体积的十分之一的浓硫酸，振摇lmin，静置分层后，弃去硫酸层(注意：用浓硫酸净化过程中，要防止发热爆炸，加浓硫酸后，开始要慢慢振摇，不断放气，然后再较快振摇)，按上述步骤重复数次，直至加入的石油醚提取液二相界面清晰均呈透明时止。然后向弃去硫酸层的石油醚提取液中加入其体积量一半左右的硫酸钠溶液。振摇十余次。待其静置分层后弃去水层。如此重复至提取液成中性时止(一般2～4次)，石油醚提取液再经装有少量无水硫酸钠的筒形漏斗脱水，滤入250mL平底烧瓶中，用旋转蒸发器浓缩至5mL，定容10mL。定容，供气相色谱测定。

7.2.2 柱层析净化法(B法)：遵照GB/T 17332-1998中6.2的净化步骤进行。

7.3 气相色谱测定

7.3.1 测定条件A

7.3.1.1 柱

(1)玻璃柱：2.0m×2mm (i.d)，填装涂有1.5％ OV-17+1.95％ QF-1的Chromosorb WAW-DMCS, 80～100目的担体。

(2)玻璃柱：2.0m×2mm(i.d),填装涂有1.5％ OV-17+1.95％ OV-210的Chromosorb WAW-DMCS-HP, 80～100目的担体。

7.3.1.2 温度：柱箱195～200℃，汽化室220℃，检测器280～300℃。

7.3.1.3 气体流速：氮气(N₂),50～70mL/min。

7.3.1.4 检测器：电子捕获检测器(ECD)。

7.3.2 测定条件B

7.3.2.1 柱：石英弹性毛细管柱DB-17,30m×0.25mm (i.d)。

7.3.2.2 温度：(柱温采用程序升温方式)
  进样口220℃，检定器(ECD) 320℃。

7.3.2.3 气体流速：氮气1.0mL/min，尾吹37.25mL/min。

7.3.3 气相色谱中使用农药标准样品的条件

标准样品的进样体积与试样的进样体积相同，标准样品的响应值接近试样的响应值。当一个标样连续注射进样两次，其峰高(或峰面积)相对偏差不大于7％，即认为仪器处于稳定状态。在实际测定时标准样品和试样应交叉进样分析。

7.3.4 进样

7.3.4.1 进样方式：注射器进样。

7.3.4.2 进样量：1～4uL。

7.3.5 色谱图

7.3.5.1 色谱图

图1采用填充柱；图2采用毛细管柱。

图1六六六、滴滴涕气相色谱图(1)

1-a-BHC;2-γ-BHC; 3-β-BHC;4-δ-BHC; 5-p,p'-DDE；6-o,p'-DDT；7-p,p'-DDD; 8-p,p'-DDT

7.3.5.2定性分析

(1)组分的色谱峰顺序：a-BHC、γ-BHC、β-BHC、δ-BHC、p,p'-DDE、o,p'-DDT，p,p'-DDD，P,P'-DDT。

(2)检验可能存在的干扰，采取双柱定性。用另一根色谱柱1.5％ OV-17-1.95％ OV-210的Chromosorb WAW-DMCS-HP 80～100目进行确证检验色谱分析，可确定六六六、滴滴涕及杂质干扰状况。

图2六六六、滴滴涕气相色谱图(2)

1-a-BHC;2-γ-BHC; 3-β-BHC;4-δ-BHC;5-p,p'-DDE;6-o,p'-DDT; 7-p,p'-DDD; 8-p,p'-DDT

7.3.5.3定量分析

(1)气相色谱分析

吸取1 uL混合标准溶液注入气相色谱仪，记录色谱峰的保留时间和峰高(或峰面积)。再吸取luL试样，注入气相色谱仪，记录色谱峰的保留时间和峰高(或峰面积)，根据色谱峰的保留时间和峰高(或峰面积)采用外标法定性和定量。

(2)计算

式中 X—样本中农药残留量，mg/kg;

c_is—标准溶液中i组分农药浓度，ug/mL;

v_is—标准溶液进样体积，uL;

V—样本溶液最终定容体积，mL;

V_i—样本溶液进样体积，uL;

H_is(S_iS)—标准溶液中i组分农药的峰高，mm或峰面积，mm²;

H_i(S_i)—样本溶液中i组分农药的峰高，mm或峰面积，mm²;

m—称样质量，g。

8 结果表示

8.1 定性结果

根据标准样品的色谱图中各组分的保留时间来确定被测试样中出现的六六六和滴滴涕各组分数目和组分名称。

8.2 定量结果

8.2.1 含量表示的方法

根据式(1)计算出各组分的含量，以mg/kg表示。

8.2.2 精密度

变异系数(％)：2.08％～8.19％。

8.2.3准确度

加标回收率(％)：90.0％～99.2％。

8.2.4检测限

最小检测浓度：0.49×10^-4～4.87×10^-3 mg; kg。