一、实验目的

掌握比色法测定5'肌苷酸二钠与5'一鸟苷酸二钠(I+G)复合增味剂中核苷酸二钠含量的原理和方法。

二、实验原理

5'一肌苷酸二钠与5'一鸟苷酸二钠复合增味剂是5’一肌苷酸二钠(IMP)与5'_鸟苷酸二钠(GMP)按1：1比例的混合物，二者在紫外光区域的最大吸收波长相近，它们的吸收光潜重叠干扰严重，因此不能利用单一物质的定量分析方法来对其进行分析，只能根据双波长测定的加和性原理，在IMP，与GMP适当的波长下，分别测定}昆合物的吸光度及等量IMP、GMP的吸光度，利用双波长分光光度法原理计算混合物中IMP和GMP的含量。

三、仪器与试材

1．仪器与器材

紫外分析仪(254nm波长)、紫外分光光度计、恒温水浴锅、微量注射器、展开槽、Ⅲ号新华滤纸(色谱用纸)等。

2．试剂

除特别说明外，实验中所用试剂均为分析纯，水为去离子水或蒸馏水。

(1)常规试剂与溶液：(NH4)2SO4、HCl、异丙醇、Hcl溶液(0.01mo1／L)。

(2)展开剂：饱和(NH4)2SO4溶液异丙醇一H2O溶液(79+2+19，体积比)。

3．实验材料

2～3种5’一肌苷酸二钠与5’鸟苷酸二钠(I+G)复合增味剂，各50g。

四、实验步骤

1．分离提取

(1)称取1.000g样品，用水溶解并稀释至100mI。。

(2)取10.0μL点样于Ⅲ号新华滤纸，于展开剂中展开30cm后，取出晾干。

(3)在紫外分析仪中，以铅笔勾出(两个)紫外斑点的轮廓。

(4)将斑点滤纸剪下后，分别置于两支小试管中，各加4.0mLHCl溶液，置于80℃水浴，保温30min，冷却，即为IMP或GMP的样品提取液。

2．IMP与GMP组分的判定

分别将上述样品提取液倒入石英比色皿中，以HCl溶液作空白对照，以紫外分光光度仪在240～265nm范围内扫描，最大吸收波长为(250±2)nm的，即为IMP，最大吸收波长为(256±2)nm的，即为GMP。

3．IMP和GMP含量的测定

以HCl溶液作空白，在250nm、260nnl处分别测定IMP与GMP样品提取液的吸光度。根据以下两式分别计算样品中IMP和GMP的含量，两者之和即为总量。

X1=（400×527×A1/11.7×103×m1）×0.1×100

式中，X为IMP的含量，％；400为稀释倍数；527为IMP的相对分子质量；11．7×103为IMP的摩尔吸光系数；0.1为样品的定容体积，L；m1为样品的质量，g；A1为IMP在波长250nm处的吸光度。

X2=（400×533×A2/12.2×103×m2）×0.1×100

式中，X2为GMP的含量，％；400为稀释倍数；533为GMP的相对分子质量；12．2×103为GMP的摩尔吸光系数；0．1为样品的定容体积，L；m。为样品的质量，g；A2为GMP在波长260nm处的吸光度。