一、实验目的

掌握比色法测定果冻中甜蜜素即环已基氨基磺酸钠(sodiumcyclamate)含量的原理与方法。

二、实验原理

在H2SO4酸性介质中甜蜜素与NaNO2反应，生成环己醇业硝酸酯，与磺胺重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合生成在550nm波长处有吸收峰的红色染料，测Am550NM值，与标准比较可实现定量分析。

三、仪器与试材

1．仪器与器材

分光光度计、离心机、剪刀、透析用玻璃纸等。

2．试剂

除特别说明外，实验中所用试剂均为分析纯，水为去离子水或蒸馏水。

(1)常规试剂：氯仿、甲醇、NaCl、NaNO2、H2SO4、尿素、HCl、盐酸荼乙二胺、HgCl2和磺胺(C6H8O2N2S)等。

(2)常规溶液：NaNO2溶液(10g／L)、H2SO4溶液(100g／L)、尿素溶液(100gL，现用现配或于4℃保存)、HCl溶液(0．01mol／L、100gL)、盐酸萘乙二胺溶液(1g／L)。

(3)透析剂：取0．5gHgCl和12．5gNaCl于烧杯中，以HCl溶液(0．01mol／L)溶解并定容至100mL。

(4)磺胺溶液(10g／L)：取1g磺胺溶于HCl溶液(100g／L)中，并定容至100mL。

(5)甜蜜素标准溶液(1mg／mL)：取0．1000g环己基氨基磺酸钠，加水溶解并定容至100mL。临用时，稀释10倍。

3．实验材料

2～3种果冻，各200g。

四、实验步骤

1．样品提取

(1)将果冻以剪刀剪碎成小颗粒后，．称取10．00g于玻璃透析纸中，加10mL透析剂。

(2)将透析纸口扎紧，放入盛有100mL水的200mL广口瓶内，加盖，透析20～24h得样品透析液，备用。

2．测定

(1)于2支50mL带塞比色管中，分别加入10mL样品透析液和10mL甜蜜素标准液，于0～3℃冰浴中，加入lmLNaNO2溶液和lmLH2SO4溶液，摇匀，冰浴1h，并不断摇匀。

(2)加15mL氯仿，振动lmin，静置：除去上层液；再加15mL水，振动1min，静置，除去上层液。

(3)加10mL尿素溶液和2mLHCl溶液(100g／L)，振动5min，除去上层液；加15mL水，振动lmin，再除去上层液。

(4)分别从比色管中，吸取5mL氯仿溶液于2支25mL比色管中。同时，取另一支比色管以5mL氯仿作参比。

(5)于各管中加入15mL甲醇、lmL磺胺溶液，冰水浴15min后，取出恢复至室温。

(6)加1mL盐酸茶乙二胺溶液混匀后，加甲醇至刻度(25mL)，在30℃下放置20min后，于波长550nm处，以参比调零，测得样品透析液和标准液的吸光度，分别记作A及As。

(7)另取2支50mL带塞比色管，分别加入10mL水和10mL透析液，除不加NaNO2溶液外，其他按“(1)～(6)”进行操作，吸光度分别记作As0及A0。

3．计算

样品中甜蜜素的含量按下式计算：

x=c/m×[(A—A0)/(As—As0)]×[(100＋10)/V]

式中，x为样品中甜蜜素的含量，g／kg；m为样品的质量，g；V为测定时透析液的用量，mL；c为标准管甜蜜素的质量，mg；As为标准液的吸光度；As0为水的吸光度；A为样品透析液的吸光度；A0为不添加NaNO2溶液的样品透析液的吸光度。

五、注意事项

本方法也可以用于其他食品样品中甜蜜素含量的分析，但是不适用于白酒中甜蜜素的测定，因为白酒中环己醇及环己基的类似物质与NaNO2反应后；也生成环己醇亚硝酸酯，与甜蜜素(环己基氨基磺酸钠)和NaNO2的反应产物类似，容易出现假阳性。

中国标准物质网