微核（micronucleus）是在细胞的有丝分裂后期染色体有规律地进入子细胞形成细胞核时，仍然滞留在细胞质中的染色单体或染色体的无着丝点断片，或因纺锤体受损而丢失的整条染色体。它在末期以后，单独形成一个或几个规则的次核，被包含在子细胞的胞质内而形成，因比主核小，故称为微核。本试验是一种体外测试有害因子遗传毒性的方法，通过在人类外周血淋巴细胞体外培养过程中加入受试物，检测细胞微核情况来评价受试物的遗传毒性。同时也成为检测致突变、致癌、致畸物质对机体遗传效应的一种重要手段。

【材料】

1．生物显微镜、恒温水浴箱、摄子、注射器、灌胃针头、载玻片、塑料吸瓶、乳钵等。

2．吉姆萨（Giemsa）染液。取吉姆萨染料3.8g，置玛瑙乳钵中，加少量甲醇研磨。逐渐加甲醇至375 ml，待完全溶解后，再加125 ml甘油，放入37℃温箱中保温48小时。保温期间振摇数次，使充分溶解。取出过滤,2周后使用，作为吉姆萨染液原液。使用时，取1份吉姆萨染液原液，与9份1/15mo1/L磷酸盐缓冲液（pH 6.8)混合。

3.磷酸盐缓冲液（pH 6.8)。

4．甲醇（分析纯）。

5. 0.075mol/L KCl低渗液。

6．人外周血淋巴细胞。

【方法】

细胞培养：按人类外周血染色体培养常规方法采血、接种，按组分别加入受试物培养72小时，收获前不用加秋水仙素，收获标本，离心，去上清液。

1．低渗加入0.075mol/L KCl溶液4m1。混匀后放入37℃恒温水浴箱中低渗处理10分钟。低渗时间可根据预实验中细胞完整程度进行调整。

2．预固定低渗结束后加入甲醇：冰醋酸（3:1)固定液1 ml，混匀后离心（1000r/min, 5分钟）。

3．固定弃上清液，加入5 ml固定液，混匀后1000r/min离心5分钟。弃上清液，留沉淀物。可按本方法再固定一次。

4．滴片加入少量固定液混匀成细胞悬液，滴片。

5．染色用Giemsa染液染色10分钟。自来水细水冲洗后，晾干。

6．观察与计数先以低倍镜、高倍镜粗检，选择细胞分散均匀，染色良好的区域，转到油镜下观察转化的淋巴细胞，进行微核的观察和计数。转化淋巴细胞与未转化淋巴细胞比较，前者细胞较大，胞核明显偏离中心，染色质较细致疏松或呈网状、核仁多，胞质丰富，常见空泡和伪足。

7．镜检及统计分析先在低倍镜下选择细胞完整、分散均匀、着色适当的区域，然后在油镜下观察，盲法计数转化淋巴细胞中的微核，每例观察1000个细胞，检测结果以微核率(1/1000）表示。微核的识别（图13-1)：微核是存在于已转化的胞质完整的淋巴细胞中的小核，其直径为主核的1/3以下，形态为圆形或椭圆形，嗜色性和主核一致或略浅，必须与主核完全脱离。一个细胞中，不论出现一个微核或多个微核，均按一个有微核的细胞计数，微核细胞率以千分率表示，即1000个已转化的淋巴细胞中有微核的细胞数。

【结果与分析】

实验组的微核率与对照组的微核率相比有明显的剂量反应关系且有统计学意义时，即可认为结果阳性。