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使用细胞G1期可逆性抑制物,如洛伐他汀(lovastatin )、含羞草素(mimosine)等,均可使细胞可逆性停留在G1期的不同阶段。
【材料】
1.指数生长期的悬浮细胞或贴壁单层细胞;
2.试剂洛伐他汀,用95%乙醇稀释至50mg/ml;1mol/L NaOH, 1mol/L HCl,无菌去离子水,培养液等;
3.仪器离心机、C02培养箱等。
【方法】
1.活化洛伐他汀洛伐他汀在加入培养细胞前必须进行活化,即用95%乙醇稀释至50mg/ml,先用lmol/L NaOH调高pH,然后再用1 mol/L HCl中和。
2.经活化后的洛伐他汀用无菌去离子水稀释到4mg/ml(1Ommol/L)使用,或置-20℃冰箱冻存备用。
3.取指数生长期细胞,贴壁单层细胞的密度应用30%~50%汇合。重悬浮细胞后加入含洛伐他汀的培养液中,根据细胞种类不同,洛伐他汀的有效浓度为10~60 umol/L, 37℃培养,至少要培养一个倍增时间。
【结果】
在含有洛伐他汀的培养液中培养1个倍增时间以上,即可获得可逆性停留在G1期的细胞。欲解除洛伐他汀的抑制,可将细胞用PBS或不含洛伐他汀的培养液于37℃洗2次,然后将细胞用含甲经戊酸的培养液重悬。甲经戊酸的使用浓度应在所用洛伐他汀浓度的100倍以上。
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