细胞系是前人从来自人或动物的肿瘤组织或正常组织的细胞中，经长期选育而建立的传代细胞，包括有限传代的二倍体细胞系和无限传代细胞系。传代细胞的染色体组型发展为非整倍体或二倍体低于75%，这种非整倍体细胞在体外具有无限传代的生命力。传代细胞的特性是：①具恒定繁殖特性，少数细胞即有繁殖能力，在琼脂内能形成克隆；有的为贴壁生长，有的悬浮生长；②染色体组型为异倍体，大多数人源细胞染色体为60～70条左右；③保留种属特异性，但组织分化性与脏器特性均消失；④具致癌性。细胞系的维持是通过换液、传代、再换液、再传代和细胞冻存、复苏而实现的。每一个细胞系都有其自身的特点，而且细胞繁殖迅速，易获取、易保存，已为各实验室广泛采用。

1．贴壁细胞的传代培养与维持

【材料】

（1）细胞系：Hela细胞。

(2）培养液与试剂：生长液为含10％小牛血清的RPMI 1640液，维持液用含2％小牛血清的RPMI 1640液；Hanks液，0.25%胰蛋白酶，0.02% EDTA，青、链霉素（PS),5.6% NaHC0₃。

(3)培养器具：小三角烧瓶，培养瓶，无菌吸液管（5 ml及1m1)、毛滴管，废液瓶等。

【方法】

(1)选生长良好的HeLa细胞一瓶，轻轻摇动培养瓶数次，悬浮起浮着在细胞表面的碎片，然后连同生长液一起倒出，用Hanks液洗一次。

(2）从无细胞面侧加入0.25%胰蛋白酶液或胰蛋白酶一EDTA消化液4～5 ml，翻转培养瓶，使消化液浸没细胞1分钟左右。

(3)翻转培养瓶，放置5～10分钟，为促进细胞的消化，可以加入37℃预热的消化液，或在细胞面向上时，用手掌贴着细胞面的瓶外壁，待肉眼观察细胞面出现布纹孔状为止。

(4）倒出消化液，如系EDTA消化，需沿细胞层的对面加Hanks液4～5ml洗涤，洗涤时轻轻转动培养瓶，让液体在瓶内慢慢流动，以洗掉消化液；如系胰蛋白酶消化，倒掉胰酶后可不洗涤。

(5)沿细胞面加入适量新配制的生长液，洗下细胞，并用吸管吹打数次，使细胞分散开，按1:2或1:3分配传代培养。

(6) 37℃培养，接种后30分钟左右可贴壁，48小时可换生长液，一般3～4天可形成单层，形成单层后再换维持液供试验用。

2．悬浮细胞的传代培养与维持悬浮细胞传代的间隔一般是每周1～2次。实际上需根据细胞的性质（尤其是增殖速度），使用目的和接种的数量而改变。当传代的间隔为每周1次时，应3～4天换液1次。

【材料】

(1)细胞系：人类白血病（K562）细胞。

(2）培养液及试剂：RPMI 1640生长液。

(3）培养瓶、无菌吸液管（5 ml及l ml)、废液瓶等。

【方法】

(1)选生长良好的K562细胞一瓶，轻轻加入等量的生长液。

(2）用无菌吸液管轻轻吹打，使K562细胞均匀悬浮，然后吸出一半的细胞悬液加入另一个培养瓶中。

(3) 37℃,5% C0₂孵箱中培养24～48小时。

(4）如果细胞比较浓，可按1:3分配传代培养。

【注意事项】

(1)细胞系档案要完整记录，如组织来源、生物学特性、培养液要求、传代和换液的时间与规律，细胞的遗传学标志，生长形态，常规病理染色的标本等。无论在交流或购买的细胞系，或自建的新细胞系时都要尽可能将上述资料收集齐全。

(2）细胞系的传代、换液一般都有自身的规律性，因而在维持传代时要注意保持其稳定的规律性，并要严格操作程序，传代时所用器械严禁交叉使用，以保证细胞正常生长，保持细胞的一致，防止细胞之间的交叉污染。

(3）实验室的每一种细胞系都应有充分的冻存储备，防止由于培养细胞污染等因素造成细胞系的绝种。另外，二倍体细胞等有限传代细胞系如果暂时不用，最好将其冻存，以免传代过多而造成细胞衰老或生物学特性发生改变。