一、生物安全柜的选择

1.生物安全柜各等级间区别

生物安全柜是一种负压净化工作台，可以防止操作者和环境暴露于实验室过程中产生的有害气溶胶，是传染性微生物的牢笼。Ⅰ级生物安全柜本身无风机，依赖外接通风管中的风机带动气流，柜内气流方式为乱流，可向室内排风。由于不能保护柜内样品，目前已较少使用。Ⅱ级生物安全柜可提供对工作人员、环境和样品的保护，柜内气流方式为单向流。Ⅲ级生物安全柜的试验品通过双门的传递箱进出安全柜，适用于高风险的生物试验，可向室内排风，柜内气流形式为乱流。详细指标区别如表1、表2所示。

<CTSM> 表1 实验室生物安全等级适用的生物安全柜</CTSM>

<CTSM>表2Ⅱ级生物安全柜各型号间区别</CTSM>

2.生物安全柜等级的选择

实验室选择生物安全柜时，应详细了解实验过程中微生物实验的生物安全级别，根据个人、环境、实验室实际环境选取不同级别(型号)的生物安全柜。

生物安全一级(P1):进行试验研究用的物质都是已知的，适合所有特性都已清楚并且已证明不会导致疾病的多种微生物物质。对操作人员和环境潜在无危险或危险小，实验室没有必要和建筑物中的一般行走区分开，一般按照标准的分级生物操作在开放的实验室台面上开展工作。一般无须使用生物安全柜，或使用I级生物安全柜。

生物安全二级(P2):进行试验研究用的物质是一些已知的中等程度危险性的并且与人类某些常见疾病相关的物质。与P1的区别在于:①操作人员均应接受过病原处理方面的特殊培训，并由有资格的工作者指导。②进行实验时限制进入实验室。③对于污染的锐器应特别注意。当可能产生微生物气溶胶或出现溅出的操作时，并且对样品保护无要求时，可使用I级生物安全柜；当处理感染性材料时，应使用部分或全部排风的II级生物安全柜；若涉及处理化学致癌剂、放射性物质和挥发性溶媒，则只能使用II级B2型全排风生物安全柜。

生物安全三级(P3):进行试验研究的物质一般都是本土或者外来的有通过呼吸传染使人们致病或者有生命危险可能的物质。在该级别中开展有关内源性和外源性病原的工作，若因暴露而吸入该病原会引发严重的可能致死的疾病。我们需要保护一切在周围环境中的操作者免于暴露于这些有潜在危险的物质中。所有与传染源操作有关的步骤都在生物安全柜或其他物理抑制装置中进行，最好选用II级或III级生物安全柜，所有涉及感染材料的操作，应使用全排风型II级(B2型)或III级生物安全柜，实验室需要特殊设计和施工，室内为负压。

生物安全四级(P4):进行试验研究的物质是一些非常高危险性并且可以致命的有毒物质，可通过气溶胶而致实验室感染或未知传染风险感染。在这样的实验操作中应选用III级生物安全柜及正压防护服。如SARS病毒对人或环境具有中度潜在危险，对携带该病毒的患者样本处理均应在P2或P2以上实验室中进行。为了对操作人员和环境及样品均提供有效的保护，当人员穿着正压防护服时，实验室可选用II级以上或全排风式II级(B2型)生物安全柜。

二、生物安全柜操作注意事项

1.主机操作注意事项

(1)生物安全柜不是超净工作台。超净工作台提供的是对样品的保护，无法对操作者和环境提供保护；正确选取生物安全柜可同时提供对操作者、环境和样品的保护。

(2)二级生物安全柜开机平衡后才能使用。二级生物安全柜都存在一个开口的前操作面，便于操作的同时也带来一个污染的可能，如果平衡不好，就会产生区域性污染，无法避免外界进入操作室污染样品以及操作室外泄污染操作人员。

(3)电动前窗有利弊。国外很多国家对生物危害性实验室配置双供电系统，避免一个供电系统出现故障时的生物危害性物质外泄。在国内，大多数实验室没有建设此项配置。电动前窗一旦在实验过程中停电，就会产生很大的危险，造成无法弥补的损失。所以电动前窗虽能给实验人员提供方便，但也存在一定的安全隐患。手动前窗与电动前窗在操作时都有固定的高度，所以电动前窗的意义并不重要。

(4)风速报警时需立即停止实验。生物安全柜是否还处于对操作者、环境和样品的正常保护，作为操作使用人员，有义务按周期向相关部门申请检测。在平常使用过程中，一旦由于滤膜堆积而造成下降风速降低，就会产生循环气流不均匀，风速下降。如果下降气流降低，会带来样品污染的可能；如果吸入风速降低，可能造成人员被污染或达不到保护要求。

(5)侧壁负压容易被忽略。除III级生物安全柜外，其他等级安全柜柜体内部操作室均为正压，如果有壳体破损和泄漏点存在，就会产生向外的泄漏。因此在侧壁和背板形成负压保护可以有效降低泄漏的可能性。国内少数安全柜在工作结束后，其风机可以进一步进行一段时间的空转来洁净消毒。如无此功能，操作者需要在实验结束后，将柜体继续开启一定时间，以最大程度排出柜内污染源。

2.操作人员注意事项

(1)操作人员必须做好个人防护后才能进行生物安全柜的操作。

(2)操作人员先把手臂放入生物安全柜内大约1min，才能进行实验操作，这样可以使安全柜稳定并且能让气流清扫掉手臂表面的微生物污染。

(3)为了避免影响正常的风路状态，实验人员柜内操作时手应该尽量平缓移动。

(4)所有的操作应该在距离前面的格栅30cm外的台面进行，前面的格栅不能被任何物品阻挡。

(5)所有的材料应该放在距离安全柜前面的格栅和后面工作台面边缘尽可能远的位置，柜内尽量避免震动仪器(例如离心机、旋涡振荡器等)的使用。容易产生气溶胶的设备，应该靠近安全柜的后部放置。

(6)为了避免物品之间的交叉污染现象产生，柜内摆放的物品应该尽量呈横向一字摆开，避免回风过程造成交叉污染。同时避免堵塞背部回风隔栅影响正常风路。

(7)柜内两种及以上物品需要移动时，一定遵循低污染性物品向高污染性物品移动原则，避免污染性高的物品在移动过程中产生对柜体内部的大面积污染。

(8)柜内尽量不要使用明火。明火使用过程中产生的细小颗粒杂质将被带入滤膜区域，这些高温杂质会损伤滤膜。无法避免而必须使用的时候，宜使用低火苗的本生灯或使用电子高温灭菌设备。

(9)操作完成时所有容器和设备应进行表面消毒并拿出安全柜，对安全柜的台面、边缘、后壁和观察窗内侧进行擦拭、消毒。

(10)操作人员离开实验室应摘下手套、脱下工作服并洗手。

三、结束语

生物安全柜的正确操作可以有效阻止工作中产生的气溶胶对操作者及环境产生的危害，还可以减少样本之间由于气溶胶产生的交叉污染。在选择时应根据检验、化验样品的种类及危害程度选择适合的型号，以达到对操作人员和样品保护的最佳效果。使用过程中应严格遵守注意事项，避免发生不必要的生物危害及损伤。