(1）样品的稀释

①固体和半固体样品：称取25g样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000-10000r/min均质1一2min，或放人盛有225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1-2min，制成1：10的样品匀液。

②液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1，10的样品匀液。

用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1，10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1，100的样品匀液。同法制备适当的几个10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用一次1mL无菌吸管或吸头。

(2）倾注法接种

根据对样品污染状况的估计，选择2-3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。再及时将15-20mL冷却至46℃的平板计数琼脂培养基［可放置于（46±1)℃恒温水浴箱中保温]倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。

(3）培养

待琼脂凝固后，将平板翻转，(36士1)℃培养（(48±2)h。水产品（(30±1)℃培养（72±3)h。如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4mL),凝固后翻转平板进行培养。