1 范围

本标准规定了水产品中吡喹酮残留量的液相色谱测定方法。

本标准适用于水产品可食部分中吡喹酮残留量的测定。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

3 原理

以乙酸乙酯提取样品中的吡喹酮，经硅胶柱净化后，用反相色谱柱分离，紫外检测器检测，外标法定量。

4 试剂和材料

所有试剂应在吡喹酮出峰处无干扰峰。试验用水应符合GB/T6682一级水的要求。

4.1 吡喹酮标准品：纯度大于99%。

4.2 正己烷：色谱纯。

4.3 丙酮：色谱纯。

4.4 乙醚：色谱纯。

4.5 乙酸乙酯：色谱纯。

4.6 乙腈：色谱纯。

4.7 吡喹酮标准溶液：准确称取吡喹酮0.0100g，乙腈溶解，定容至100mL，此液浓度为100μg/mL。-18°C避光保存，保存期2个月。临用前用乙腈配制成所需浓度。

4.8 乙醚-正己烷混合溶液：量取60mL乙醚，加入到40mL正己烷中。

4.9 丙酮-正己烷混合溶液：量取60mL丙酮，加入到40mL正己烷中。

4.10 层析用碱性氧化铝：100目〜200目。

4.11 固相萃取柱：500mg/6mLLC-Si柱或性能相当的硅胶柱。

5 仪器

5.1 高效液相色谱仪：具紫外检测器。

5.2 电子天平：感量0.0001g和0.01g各一台。

5.3 均质机。

5.4 离心机：4000r/min。

5.5 旋转蒸发器。

5.6 固相萃取装置

5.7 氮吹仪。

6 测定歩骤

6.1 样品处理

6.1.1 制样

鱼，去鳞、去皮，沿脊背取肌肉；虾，去头、去壳、去肠腺，取肌肉部分；蟹、甲鱼等取可食部分，样品均质混匀。一18°C以下冷冻保存备用。

6.1.2 提取

将样品解冻，称取3g样品（准确至0.01g）置于50mL离心管中，加入20mL乙酸乙酯，均质30s，加入10g碱性氧化铝，振荡10min，4000r/min离心10min，将乙酸乙酯层移入100mL梨形瓶中，残渣备用。另取一50mL离心管，加入20mL乙酸乙酯，清洗均质机30s，将此液倒入上述残渣中振荡提取10min，4000r/min离心10min，将乙酸乙酯层合并至100mL梨形瓶中，于30°C减压蒸干乙酸乙酯，用10mL正己烷溶解残渣。

6.1.3 净化

将6.1.2中的正己烷溶液加入到硅胶柱中（硅胶柱临用前用6mL丙酮、6mL正己烷依次进行活化），流速控制为每秒一滴，然后用2mL正己烷洗梨形瓶并将溶液加入到柱中，用6mL乙醚-正己烷混合溶液（4.8）洗硅胶柱，弃去流出液，将柱子吹干，用8mL丙酮-正己烷混合溶液（4.9）洗脱，将洗脱液接收至离心管中，于50°C下氮气吹干。用1mL乙腈溶解残渣，涡旋混合1min，过0.45滤膜后，供液相色谱分析。

6.2 样品测定

6.2.1 测定条件

6.2.1.1 色谱柱：ZORBAX-SBC18柱（250mmX4.6mm，5μm）或性能相当的色谱柱。

6.2.1.2 流动相：乙腈+水，梯度洗脱程序见表1。

6.2.1.3 流速：0.9mL/min。

6.2.1.4 柱温：25°C。

6.2.1.5 进样量：30μL。

6.2.1.6 检测波长：214nm。

 

6.2.2 色谱分析
分别注入30mL吡喹酮标准工作溶液及样品溶液于液相色谱仪中，按上述色谱条件进行分析，记录峰面积或峰高，响应值均应在仪器检测的线性范围之内。根据吡喹酮标准品的保留时间定性，外标法定量。标准品色谱图参见附录A。

7 空白试验

除不加试样外，均按上述测定步骤进行。

8 结果计算

样品中吡喹酮的残留量按式⑴计算，计算结果需扣空白值。

 

式中：

X——样品中吡喹酮的残留量，单位为微克每千克( μg/kg)

Cs—吡喹酮标准溶液浓度，单位为微克每毫升( μg/mL)；

A——样品中吡喹酮的峰面积或峰高；

V——样品定容体积，单位为毫升(mL)；

As——吡喹酮标准溶液的峰面积或峰高；

m——样品称样量，单位为克(g)。

9 方法回收率

方法回收率≥70%。

10 方法检出限

方法检出限：10μg/kg。

11 精密度

2次平行测定结果相对标准偏差≤15%。

12 方法线性范围

方法线性范围：0.02μg/mL~20μg/ml。

 

 

文章来源：《水产品兽药残留限量及监测方法查询手册》

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