[实验器材]

50-200μl微量移液器，盒装无菌200μl吸嘴，数码倒置显微镜，血细胞计数板，计数板用盖玻片，0.4％台盼蓝染液，待检细胞悬液，Eppendorf管，酶标板8孔条。

[操作步骤]

1．单细胞悬液制备

按照贴壁细胞或悬浮细胞的收集方法进行细胞收集，然后将待检细胞悬液吹打成单细胞悬液。细胞计数后调节细胞密度为2×105-5×105/ml。

2．台盼蓝染色

按照1:1比例混合上述细胞悬液和台盼蓝染液。可使用Eppendorf管或酶标板的8孔条（或12孔条）反应孔进行稀释。稀释体系控制在200-400μl为宜。

3．装载血细胞计数板

取上述染色后的细胞悬液适量到干净的血细胞计数板计数窗。适宜的加载量是刚好充满计数窗，无溢出，否则需重新清洁血细胞计数板，另行加载细胞悬液。

4．细胞计数

显微镜视场下，染色的细胞为死细胞，未染色的细胞为活细胞。在100×的接目镜视场下，类似细胞计数方法，求出4个大方格内的活细胞总数、死细胞总数。可拍摄此显微视场下的数码照片，或以此视场进行讨论学习。

5．结果计数

细胞存活率（％）=（活细胞数／细胞总数）×100%。其中，细胞总数＝活细胞总数＋死细胞总数。

［注意事项］

1．台盼蓝对人体有毒，使用时注意个人防护。

2．吸取细胞悬液时，需注意无菌操作，应在超净工作台丙使用微量移液器套装无菌吸嘴进行操作。

3．从培养物如多孔细胞培养板的培养孔直接计数时，务必使培养孔内细胞悬浮并混匀成单细胞悬液。

4.染色时间过长或使部分活细胞着色，因此需注意把握计数的效率。