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1.测定要求
(1)测定波长核对以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照,采用lcm的石英吸收池,在规定的吸收峰波长±2nm以内测试几个点的吸光度,以核对供试品的吸收峰波长位置是否正确。吸收峰波长应在该品种项下规定的波长±2nm以内,否则应考虑该试样的真伪、纯度以及仪器波长的准确度,并以吸光度最大的波长作为测定波长。
(2)吸光度读数范围一般供试品溶液的吸光度读数,应控制在0.3-0.7之间,此时测定误差最小。
(3)仪器的狭缝宽度狭缝波带宽度应小于供试品吸收带的半宽度,否则测得的吸光度会偏低。狭缝宽度的选择,应以减小狭缝宽度时供试品的吸光度不再增加为准。
(4)空白试验由于吸收池和溶剂本身可能有吸收,因此测定供试品前,应用溶解样品的同批溶剂进行空白试验,记录空白吸收读数。并将样品测得的吸光度减去空白读数,再计算含量。
2.测定方法
(1)对照品比较法分别配制供试品溶液和对照品溶液,对照品溶液中所含被测成分的量应为供试品溶液中被测成分标示量的100%±10%,所用溶剂也应完全一致,在规定的波长下测定供试品溶液和对照品溶液的吸光度后,按下式计算供试品溶液中被测物的浓度:
c供试=A供试/A对照×c对照
(2)吸光系数法按规定配制供试品溶液,并在规定的波长处测定其吸光度,以该品种在规定条件下的吸光系数计算含量。被测溶液的百分浓度。按下式计算:
c(%)=A/E1%1cmL
式中A——样品液的吸光度;
L——液层厚度,cm。
(3)分光光度法计算本法有多种使用时应注意当吸光度处在吸收曲线的陡然上升或下降的部位测定时,波长的微小变化可对测定结果造成显著影响,故对照品和供试品测试条件应尽可能一致。
(4)吸光系数E黔的测定方法精密称取被测物对照品适量(双份)加溶剂溶解并定量稀释成一定浓度的溶液,使溶液的浓度能满足测得的吸光度介于0.6-0.8之间,然后精密吸取适量,用同批溶剂将溶液稀释一倍,在规定波长分别将高低浓度的溶液于四种不同型号的紫外分光光度仪上以溶剂为空白测定各自的吸光度,并注明测定时的温度。计算吸光系数(E1%cm)值,同一台仪器测定二份间结果的偏差应不超过1%,对各台仪器测得的E1%cm值进行统计,相对标准偏差应不超过1.5%,取平均值作为该药物的吸光系数。
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