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SCE是化学毒物引起的一种细胞遗传损伤。主要反映受试物导致染色体同源位点上DNA复制产物互换频率的改变,SCE频率可反映细胞在S期DNA受损程度。
1.样品的采集与保存
根据检测目的和采样常规选点,采集水样,每点50-100L,最好在现场初步处理水样。先用普通滤纸或多层纱布将粗泥砂过滤掉,用树脂吸附富集有机致突变物,以减少采样的重量,然后再运回实验室进一步处理。其他化学污染物,必须了解其主要成分、物态、溶解度和pH值等。
2.样品预处理
水样用XAD-2树脂吸附有机物,以30-40ml/min速度过柱,用丙酮或乙醚洗脱,丙酮先与树脂平衡30min,再以1-2ml/min收集洗脱液,在60℃氮气流浓缩至干,用二甲亚砜定容,存4℃冰箱备用。
3.受试生物物种与材料
目前对化学物质和环境污染物遗传毒性监测,最常用的高等动物细胞有中国仓鼠肺成纤维细胞系(CHL、V79)、中国仓鼠卵巢细胞系(CHO)和人体淋巴细胞等。使用培养细胞检测的优点在于:首先,实验条件容易掌握(如给受试物的量、时间和重复实验等);其次,细胞分裂周期一致,染色体数目和形状易观察,可得到较多的染色体中期分裂相;另外,细胞株可长期保存,使用时可随时复苏,非常方便。应用最多的培养细胞有CHL、CHO、V79细胞株。仓鼠染色体数目少(2N=24,或2n=24+1)、个大,在镜下易分辨。用人淋巴细胞的优点是实验结果不用外推,直接反映了对人体的影响。进行整体实验选择较多的物种是小白鼠,代表整体对毒物的反应,实验设备和用药品数量相对少,可节省费用。
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