DEAE-葡聚糖（Diethylaminoethyl-dextran）介导的质粒DNA转染方法，最早是在1965年出现，并被用于辅助病毒感染靶细胞的研究。后来发现，这种物质也能提高质粒DNA导入靶细胞的效率，现在仅有少数人采用。DEAE-葡聚糖转染法仅限于瞬时转染，可重复性好，转染时要除去血清。

实验原理

带正电的DEAE-葡聚糖可以结合带负电的DNA分子，使得DNA复合物结合在带负电的细胞表面。通过使用DMSO或甘油获得的渗透休克，也可能是细胞内吞作用，使得DNA复合物进入细胞。

材料（试剂及设备）

(1）缓冲液与溶液 TBS缓冲液（pH7.4、0. 05mo1/L Tris·HCl,过滤除菌，4℃储存）；TBS配制的10mg/ml DEAE-dextran（将100mgDEAE-dextran溶于2ml灭菌水中得到50mg/ml的储液，121℃高压灭菌20min。用无菌TBS缓冲液配制成10mg/ml备用）；PBS缓冲液(pH7. 4 )；pH7. 4的PBS缓冲液配制的10％的DMSO（二甲基亚砜）溶液（V/V)，过滤除菌，4℃避光贮存。

(2）核酸与寡核苷酸 质粒DNA：转染前将所要转的质粒在细胞室内无菌沉淀(1/10体积的3mol/L NaAC, 2倍体积的无水乙醇），在超净台中用70％的乙醇（无水乙醇与灭菌水在无菌状态下配制）清洗2次，晾干，加灭菌水溶解。用0. 1×TE (pH 7.6)溶解DNA至终浓度25μl/ml，每毫升培养基需要50 μ1质粒溶液。

(3）培养基为完全培养基。

(4）其他设备细胞培养用培养箱（37℃, 5% CO2的加湿培养箱）、超净台、冰箱、离心机、Vortex振荡器（选用）、1. 5m1 EP管、移液器及tip头、试管架、计时器和60mm组织培养皿或12孔板。

(S）细胞：指数生长的哺乳动物细胞培养物。细胞准备：转染前一到两天将细胞传代至平皿中（视目的不同所用平皿规格不同），使细胞密度在做转染时达到所需密度（具体细胞密度视细胞生长速度而定，标准是在收细胞时细胞密度达到100%）。

转染方法以10cm直径的平皿为例

（1）用40μ1 TBS溶解4 μg质粒DNA。

(2）吸弃细胞培养上清液，用37℃预热的PBS缓冲液漂洗单层贴壁细胞2次，再用完全培养基漂洗1次，加入4 ml 37℃预热的完全培养基。

(3）将40μ1质粒DNA溶液缓慢加入80 μl预热的10mg/ml DEAE-葡聚糖溶液中，混匀。

(4) 将新鲜配制的DNA-DEAE-葡聚糖溶液逐滴加入细胞培养板中，轻轻晃动至DNA溶液均匀分布。将此细胞培养皿置37℃、5% CO2的加湿培养箱中，培养4h。

(5）吸弃细胞培养上清，加入5ml含10% DMSO的PBS，室温静置1 min，吸弃上清，用5m1 PBS漂洗1次，加10m1完全培养基继续培养。