厌氧性细菌物理学分离培养法

利用加热、密封、抽气等物理学方法，以驱除或隔绝环境及培养基中的氧气，使其形成厌氧状态，有利于厌氧菌的生长发育。    

（1）厌氧罐法 :

常用的厌氧罐有Brewer氏罐，Broen氏罐和Mclntosh-Fildes二氏罐）。将接种好的厌氧菌培养皿依次放于厌氧罐中，先抽去部分空气，代以氢气至大气压。通电，使罐中残存的氧与氢经铂或钯的催化而化合成水，使罐内氧气全部消失。将整个厌氧罐放人孵育箱培养。本法适用大量的厌氧菌培养。  

（２）真空干燥器法 :

将欲培养的平皿或试管放人真空干燥器中，开动抽气机，抽至高度真空后，替代以氢、氮或二氧化碳气体。将整个干燥器放进孵育箱培养。  

（３）高层琼脂法: 

加热融化高层琼脂，冷至45℃左右接种厌氧菌，迅速混合均匀。冷凝后37℃培养，厌氧菌在近管底处生长。  

（４）加热密封法: 

将液体培养基放在阿诺氏蒸锅内加热l0min，驱除溶解于液体中的空气，取出，迅速置于冷水中冷却。接种厌氧菌后，在培养基液面覆盖一层约0.5cm的无菌凡士林石蜡，置37℃培养。此外，尚有摇振培养法，此处从略。  

（５）二氧化碳培养法: 

少数细菌如布氏杆菌(牛型)等，孵育时，需大气中添加5％~10％二氧化碳，方能使之生长繁殖旺盛。常用的方法是置于CO2培养箱中进行培养；*简单的二氧化碳培养法是在盛放培养物的有盖玻璃缸内，燃点蜡烛，当火焰熄灭时，该缸的大气中，就约增加了5％~10％的二氧化碳。也可用化学物质作用后生成二氧化碳，如碳酸氢钠与硫酸钠或碳酸氢钠与硫酸作用即可生成二氧化碳。若各用0.4％NaHCO3与30％H2SO4lmL，则可产生22.4mL的二氧化碳气体。