蛋白质印迹的步骤

蛋白质印迹主要用于检测样品中的特定蛋白质。蛋白质印迹技术的步骤如下所述。

蛋白质样品根据其大小通过SDS-PAGE进行分离。

将蛋白质转移到膜上 – 将大小分馏的蛋白质转移到硝化纤维素或聚偏二氟乙烯（PVDF）膜中。这种转移所涉及的技术是扩散转移。

阻断非特异性位点 – 膜上未被占用的位点被阻断，以防止蛋白质的非特异性结合。脱脂奶粉或牛血清白蛋白（BSA）可用于此目的。

一抗孵育 – 将封闭的膜与一抗溶液一起孵育。这些一抗与膜上的特定蛋白质结合。

二抗孵育 – 膜与二抗一起孵育，二抗与一抗结合。二抗与报告蛋白偶联。这些报告蛋白可以是生物素、碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶。

通过显色进行蛋白质检测 – 偶联酶报告基因与其底物反应，生成有色碱性磷酸酶，将 BCIP 转化为蓝色产物，而辣根过氧化物酶转换鲁米诺，发光。