硝酸盐还原实验

1、原理：

硝酸盐还原反应包括两个过程：

一是在合成代谢过程中，硝酸盐还原为亚硝酸盐和氨，再由氨转化为氨基酸和细胞内其它含氮化合物；

二是在分解代谢过程中，硝酸盐或亚硝酸盐代替氧作为呼吸酶系统中的终末受氢体。

硝酸盐还原过程可因细菌不同而异。有的细菌仅使硝酸盐还原为亚硝酸盐，如大肠埃希菌等；有的细菌可使其还原为亚硝酸盐和离子态的铵；有的细菌能使硝酸盐或亚硝酸盐还原为氮，如假单胞菌；有的细菌还可以将其还原产物在合成性代谢中完全利用。

2、实验方法：将待检菌接种于硝酸盐培养基(内含小倒管)中，35℃孵育1~4d。将甲、乙等量混合液(用时混合)(约0.1ml)加于试管内，立即观察结果。

3、结果：出现红色为阳性反应。若加入试剂后无颜色反应，可能是：

①硝酸盐没有被还原，试验阴性；

②硝酸盐被还原为氨和氮等其他物质而导致假阴性结果，这时应在试管内加入少许锌粉，如出现红色则表明试验确实为阴性。若仍不产生红色，表明试验为假阴性。

若要观察是否有氮气产生，可于培养基管内加1只小导管，有气泡产生，则表示有氮气生成。

4、应用：本试验广泛用于细菌鉴定。肠杆菌科细菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐;铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌等假单胞菌属均可产生氮气；有些厌氧菌如韦荣菌等试验也为阳性。