北京普天同创生物科技有限公司
一、原理
在中性洗涤剂的消化作用下,试样中的糖、淀粉、蛋白质、果胶等物质被溶解除去,不能消化的残渣为不溶性膳食纤维,主要包括纤维素、半纤维素、木质素、角质和二氧化硅等,还包括不溶性灰分。
二、试剂
(1)无水硫酸钠。
(2)石油醚:沸程30一60℃。
(3)丙酮。
(4)甲苯。
(5)中性洗涤剂溶液:将18.61gEDTA二钠盐和6.81g四硼酸钠(含10H2O)置于烧杯中,加水约150mL,加热使之溶解,将30g月桂基硫酸钠(化学纯)和10mL乙二醇独乙醚(化学纯)溶于约700mL热水中,合并上述两种溶液,再将4.56g无水磷酸氢二钠溶于150mL热水中,再并入上述溶液中,用磷酸调节上述混合液至PH值为6.9一7.1,最后加水至1000mL。
(6)磷酸盐缓冲液:由38.7mL0.1mol/L磷酸氢二钠和61.3mL0.1mol/L磷酸二氢钠混合而成,PH值为7.0。
(7)2.5%a一淀粉酶溶液:称取2.5ga一淀粉酶(美国Sigma公司,VI-A型,产品号68801))溶于100mL,PH=7.0的磷酸盐缓冲溶液中,离心、过滤,滤过的酶液备用。
(8)耐热玻璃棉(耐热130℃,美国Comning玻璃厂出品,PYREX牌(给出这一信息是为了方便本标准的使用者,并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果,则可使用这些等效产品)。其他牌号也可,但要耐热并不易折断的玻璃棉)。
三、仪器
(1)实验室常用设备。
(2)烘箱:110一130℃。
(3)恒温箱:37℃±2℃。
(4)纤维测定仪。
(5)如没有纤维测定仪,可由下列部件组成。
①电热板:带控温装置。
②高型无嘴烧杯;600mL。
③坩埚式耐热玻璃滤器:容量60mL,孔径40一6μm。
④回流冷凝装置。
⑤抽滤装置:由抽滤瓶、抽滤垫及水泵组成。
四、分析步骤
4.1试样的处理
(1)粮食:试样用水洗3次,置60℃烘箱中烘去表面水分,磨粉,过20一30目筛(1mm),储于塑料瓶内,放一小包樟脑精,盖紧瓶塞保存,备用。
(2)蔬菜及其他植物性食品:取其可食部分,用水冲洗3次后,用纱布吸去水滴,切碎,取混合均匀的样品于60℃烘干,称量并计算水分含量,磨粉;过20一30目筛,备用。或鲜试样用纱布吸取水滴,打碎、混合均匀后备用。
4.2测定
(1)准确称取试样0.5一1.00g,置高型无嘴烧杯中,若试样脂肪含量超过10%,需先去除脂肪,例如1.00g试样,用石油醚(30一60℃)提取3次,每次10mLo
(2)加100mL中性洗涤剂溶液,再加0.5g无水亚硫酸钠。
(3)电炉加热,5一10min内使其煮沸,移至电热板上,保持微沸1h。
(4)于耐热玻璃滤器中,铺1一3g玻璃棉,移至烘箱内,110℃烘4h,取出置干燥器中冷至室温,称量,得m1(准确至小数点后四位)。
(5)将煮沸后试样趁热倒入滤器,用水泵抽滤。用500mL热水(90-100℃),分数次洗烧杯及滤器,抽滤至干。洗净滤器下部的液体和泡沫,塞上橡皮塞。
(6)于滤器中加酶液体,液面需覆盖纤维,用细针挤压掉其中气泡,加数滴甲苯,上盖表玻皿,37℃恒温箱中过夜。
(7)取出滤器,除去底部塞子,抽滤去酶液,并用300mL热水分数次洗去残留酶液,用碘液检查是否有淀粉残留,如有残留,继续加酶水解,如淀粉已除尽,抽干,再以丙酮洗2次。
(8)将滤器置烘箱中,110℃烘4h,取出,置干燥器中,冷至室温,称量,得m2(准确至小数点后四位)。
五、结果计算
X=(m2-ml)/m×100
式中;X-试样中不溶性膳食纤维的含量,%;
m2-滤器加玻璃棉及试样中纤维的质量,g;
ml-滤器加玻璃棉的质量,g;
m—样品的质量,g。
计算结果保留到小数点后两位。
六、精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
七、说明及注意事项
(1)本方法适用于植物类食品及其制品中总的、可溶性和不溶性膳食纤维的测定及各类植物性食品和含有植物性食品的混合食品中不溶性膳食纤维的测定。
(2)总的、可溶性和不溶性膳食纤维的测定及不溶性膳食纤维的测定方法的检出限均为0.1mg。
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