3.2.1.7分析条件的选择

(1)提取净化条件的选择

1)样品中蛋白质沉淀剂的选择

实验表明，样品中的蛋白质对质谱测定的影响较大，有效地除去测定溶液中的蛋白质是样品提取和净化的关键所在。本方法实验了用三氯乙酸、硫酸锌和亚铁氰化钾混合溶液及钨酸钠三种脱蛋白的方法，试验表明，30mL 5%磷酸溶液提取，三氯乙酸脱蛋白效果较好。对三氯乙酸溶液(50%，质量分数)加入量优化实验结果见表3-5。

表3-5 不同三氯乙酸溶液(50%，质量分数)加入量对结果的影响

从表3-5中看出，试样用30mL 5%磷酸溶液提取加入3mL三氯乙酸溶液(50%，质量分数)时，脱蛋白效果最好，三种抗生素响应信号最高。

2)固相萃取柱的选择

本方法实验了Oasis HLB(60 mg，3 mL).BAKERBOND SPE TM (500mg，3mL)、SUPELCLEANTMLC-SCX (500 mg，3mL)、羧基和BAKERBOND SPE TM C18(500mg，3mL)单柱和双柱及不同搭配的净化效果和回收率。实验表明，BAKERBOND SPE TM苯磺酸型阳离子交换柱和羧酸型(500mg，3mL)双柱净化效果和回收率最高。因此，本方法选择这两个固相萃取柱为净化柱。

3)苯磺酸固相萃取柱洗脱条件的选择

被测物从样品中提取出来，经过苯磺酸固相萃取柱，目标物被吸附于萃取柱上。用5mL磷酸溶液和10mL水洗涤萃取柱后，大部分杂质被除去了。吸附在萃取柱上的分析物残留，再用20mL K₂PO₄缓冲溶液洗脱，通过实验确定洗脱效率最高时缓冲溶液的pH和浓度，即为最佳洗脱条件。

用阴性奶粉样品，添加相同量的标准，按相同方法，用不同pH和浓度的磷酸盐溶液做条件实验，实验数据见表3-6。

表3-6 缓冲溶液最佳洗脱条件实验结果

从表3-6中看出，磷酸盐缓冲溶液的浓度为0.2mol/L、pH为9.5时，三种抗生素响应信号最高。用阴性河豚鱼样品，添加相同量的标准，按相同方法，用不同pH和浓度的磷酸盐溶液做条件实验，实验数据见表3-7。

表3-7 缓冲溶液最佳洗脱条件实验结果

从表3-7中看出，磷酸盐缓冲溶液的浓度为0.2mol/L、pH为8.5时，三种抗生素响应信号最高。用阴性蜂王浆样品，添加相同量的标准，按相同方法，用不同pH和浓度的磷酸盐溶液做条件实验，实验数据见表3-8。

表3-8 缓冲溶液最佳洗脱条件实验结果

从表3-8中看出，磷酸盐缓冲溶液的浓度为0.2mol/L、pH为8.0时，三种抗生素响应信号最高。

文章来源：《兽药多组分残留分析技术》

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