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平面色谱的检测完全与色谱操作相分离,可以认为是一个静态的过程。在色谱分离和流动相挥发后,有色的物质能够凭视觉定位,无色物质则需要其他方法。只要有必要,任何给定的色谱馏分都能被检测以获取最大量的信息。不受时间限制是平面色谱潜在的最重要的一个方面,这是因为它可利用多种技术增强检测的灵敏度和选择对每种待测组分有最大吸收的波长。另外,可获得用于组分鉴定的原位光谱图。
展开后的纸或薄层先要将展开剂挥去,如在平面色谱上有干扰定位的不易挥发的固定相如甲酰胺等也必须用加热的方法使之除尽,然后用下述方法对纸或薄层上的组分进行定位。
1光学检出法
有些化合物在自然光下可观察到不同颜色的斑点:多数化合物在可见光下不能显此外,挥发性的酸、碱,如硝酸、盐酸、浓氨水、二乙胺等蒸气也常用于显色。
2.展层一显色法
如用含有茚三酮的正丁醇一乙醇一水做展层一显色剂,进行氨基酸的纸色谱分离,展毕取出纸条,烘干后即显示斑点,从而使展开和显色合而为一,简化了操作,显色也均匀。
3.显色试剂
显色试剂可分两类,检查一般有机化合物的通用显色剂和根据化合物的特殊亨譬团而设计的专属性显色剂。这两类显色剂在薄层色谱或纸色谱有关资料及手册上有详尽的记载。列出部分重要官能团的显色试剂。
还有一些通用显色剂:
①硫酸溶液常用的有硫酸一水(1:1)溶液;硫酸一甲醇或乙醇(1:1)溶液;1.5mol儿硫酸溶液及O.5~1.5 mol/L硫酸铵溶液,喷后于1IO~C烘烤15 min,不同有机化合物显不同颜色。
②0.5%碘的三氯甲烷溶液对很多化合物显黄棕色。
③中性0.05%高锰酸钾溶液易还原性化合物在淡红色背景上显黄色斑点。
④碱性高锰酸钾试剂还原性化合物在淡红色背景上显黄色斑点。溶液I:1%高锰酸钾溶液;溶液Ⅱ:5%碳酸钠溶液;溶液I和溶液Ⅱ等量混合应用。
⑤酸性高锰酸钾试剂喷1.6%高锰酸钾浓硫酸溶液(溶解时注意防止爆炸),喷后于180℃加热15~20 mol。
⑥酸性重铬酸钾试剂喷5%重铬酸钾浓硫酸溶液,必要时150qC加热。
⑦5%磷钼酸乙醇溶液喷后120℃加热,还原性化合物显蓝色,再用氨蒸气熏,背景变为无色。
⑧铁氰化钾一三氯化铁试剂 还原性物质显蓝色,再喷2 t001./L盐酸溶液,则蓝色加深。溶液I:1%铁氰化钾溶液;溶液Ⅱ:2%三氯化铁溶液;临用前将溶液I和溶液Ⅱ等量混合。
⑨水憎水性化合物在硅胶薄层上展开后,用水喷薄层板,对光观察,在半透明的薄层板上,显出白色不透明的斑点。这是一种非破坏性显色剂。
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