5.4 试验步骤和观察指标

5.4.1 接触受试物

受试物接触方法为经口给予。新配制的培养基冷却到55℃时,倒入受试物，快速磁搅拌2min,放入经饥饿4h的雄蝇进行喂饲,接触受试物时间3d。

5.4.2 交配程序及方法

为检测受试物对哪一期生殖细胞最敏感,将雄蝇在接触受试物后按2—3—3d间隔(分别表示对精子、精细胞和精母细胞的效应)与处女蝇交配。即每一试管以1只经处理过的雄蝇按上述程序顺次与2只处女蝇交配，再以所产F₁代按雌与雄(1：1或1：2)进行F₁—F₂交配。12d～14d后观察F₂代，孵育温度为25℃。用乙醚对果蝇施行麻醉后可进行分组及F₁代的性别分离。

每一个试验组至少应有3000个样本数。

6 数据处理和结果评价

6.1 数据处理

根据受试染色体数(即F₁代交配的雌蝇数减去不育数和废管数)与致死阳性管数求出致死率,按式(1)计算。

致死率=致死管数/受试染色体数×1000‰----------(1)

运用适合于试验设计的统计学检验方法对对照组和试验组的致死率进行统计分析。结果评价时应对试验结果的生物学意义和统计学意义同时予以考虑。

6.2 结果评价

受试物诱发的致死率明显增加，与阴性对照组相比有统计学差异,并且有剂量一反应关系时判为阳性;如无剂量一反应关系时,应至少有一时间点的阳性致死可重复并有统计学意义上的增加，也可判为阳性。

7 试验报告

7.1 试验名称、试验单位名称和联系方式、报告编号。

7.2 试验委托单位名称和联系方式、样品受理日期。

7.3 试验开始和结束日期、试验项目负责人、试验单位技术负责人、签发日期。

7.4 试验摘要。

7.5 受试物名称、有效成分CAS号(如已知)、代码(如有)、纯度(或含量)、剂型、生产日期(批号)、外观性状、有效期、保存条件、配制所用溶媒和方法以及阴性、阳性对照物的相关信息。

7.6 果蝇品系、昆虫日龄、性别、来源、检疫、孵育温度。

7.7 试验条件和方法、剂量分组、剂量选择依据、染毒途径和方式、受试物配制过程、交配程序和比例、处理的雄性数、不育的雄性数、已建立的F₂培养群的数目、没有后代的F₂培养群的数目、所测试的染色体数、在每一生殖细胞期检测的带有致死基因的染色体数、统计方法和判定标准。

7.8 试验结果:以列表方式报告受试物组、阴性对照组和阳性对照组的被试验的染色体数、无生育力的雄性果蝇数、致死染色体数、致死率,并写明结果的统计方法。

7.9 试验结论:根据试验结果,对受试物是否能引起果蝇生殖细胞突变做出结论。

8 试验的解释

果蝇伴性隐性致死试验阳性结果表明在该试验条件下受试样品引起果蝇生殖细胞突变；阴性结果表明在该试验条件下受试样品对果蝇生殖细胞属非致突变物。

对F2代结果的判断标准如下：

a)每一试管在多于20个子代中没有红色圆眼的野生型雄蝇为阳性,属致死突变。如有2只以上的红色圆眼的野生型雄蝇者为阴性。

b)每一试管如确少于20个子代或只有一只野生型雄蝇的可疑管,需进行F₃代的观察。

c)不育：仅存雄、雌亲本而无仔蝇者。

相关链接：食品安全国家标准果蝇伴性隐性致死试验（二）

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（二）》

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