5.4.3 阅片

在油镜下阅片，每一剂量组应分析不少于100个分散良好的中期分裂相,且每个观察细胞的染色体数在2n±2范围之内。对于畸变细胞还应记录显微镜视野的坐标位置及畸变类型。

5.5 观察指标

5.5.1 染色体数目的改变

5.5.1.1 非整倍体:亚二倍体或超二倍体。

5.5.1.2 多倍体:染色体成倍增加。

5.5.1.3 核内复制:核膜内的特殊形式的多倍化现象.

5.5.2 染色体结构的改变

5.5.2.1 断裂:损伤长度大于染色体的宽度.

5.5.2.2 微小体:较断片小而呈圆形。

5.5.2.3 有着丝点环:带有着丝点部分,两端形成环状结构并伴有一双无着丝点断片。

5.5.2.4 无着丝点环:成环状结构。

5.5.2.5 单体互换:形成三辐体、四辐体或多种形状的图像。

5.5.2.6 双微小体:成对的染色质小体。

5.5.2.7 裂隙:损伤的长度小于染色单体的宽度。

5.5.2.8 非特定性型变化:如粉碎化、着丝点细长化、黏着等。

6 数据处理和结果评价

6.1 数据处理

数据按不同剂量列表,指标包括观察细胞数、畸变细胞数、染色体畸变率、各剂量组及对照组不同类型染色体畸变数与畸变率等。裂隙应单独记录和报告,但一般不计入总的畸变率。各组的染色体畸变率用x2检验进行统计学处理。

6.2 结果评价

下列两种情况可判定受试物在本试验系统中为阳性结果：

a)受试物引起染色体结构畸变数的增加具有统计学意义,并与剂量相关；

b)受试物在任何一个剂量条件下，引起的染色体结构畸变数增加具有统计学意义，并有可重复性。

7 试验报告

7.1 试验名称、试验单位名称和联系方式、报告编号。

7.2 试验委托单位名称和联系方式、样品受理日期。

7.3 试验开始和结束日期、试验项目负责人、试验单位技术负责人、签发日期。

7.4 试验摘要。

7.5 受试物:名称、鉴定资料、CAS号(如已知)、纯度、与本试验有关的受试物的物理和化学性质及稳定性等。

7.6 溶媒:溶媒的选择依据为受试物在溶媒中的溶剂性和稳定性。

7.7 细胞株:细胞株的来源、名称。

7.8 试验条件:剂量、代谢活化系统、标准诱变剂、操作步骤等。

7.8.1 代谢活化系统:制备S9所用酶的诱导剂、选用的动物品种和来源、S9混合液的配方。

7.8.2 对照物：阳性对照物的名称、生产厂家、批号和选用浓度。

7.8.3 培养液:所用培养液的名称、血清类别和使用浓度。

7.8.4 接种的细胞密度以及所用培养皿(瓶)的规格。

7.8.5 中期分裂阻断剂：名称、所用浓度、作用时间。

7.8.6 处理时间：受试物与试验系统的接触时间。

7.8.7 制片方法、分析的中期分裂相数目、结果评价方法。

7.9 试验结果。

7.9.1 试验结果应包括细胞毒性的测定、加受试物后的溶解情况及对PH和渗透压的影响(如果有影响)。

7.9.2 各剂量组和对照组细胞染色体畸变率。

7.9.3 本实验室的阳性对照组和阴性对照组(常用溶媒,如DMSO)在本实验室历史上的染色体畸变率范围和检测数(说明样品数)。

7.10 试验结论:给出受试物在试验条件下是否引起体外培养的细胞染色体畸变的结论,必要时对有关问题进行讨论。

8 试验的解释

大部分的致突变剂导致染色单体型畸变,偶有染色体型畸变发生。虽然多倍体的增加可能预示着染色体数目畸变的可能,但本方法并不适用于检测染色体的数目畸变。阳性结果表明受试物在该试验条件下可引起所用哺乳类细胞染色体畸变。阴性结果表明在该试验条件下受试物不引起所用哺乳类细胞染色体畸变。评价时应综合考虑生物学和统计学意义。

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（二）》

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