1 范围

本标准规定了食品中霉菌和酵母菌(mouldsandyeasts)的计数方法。

本标准适用于各类食品中霉菌和酵母菌的计数。

2 设备和材料

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：

2.1 冰箱：2℃～5℃。

2.2 恒温培养箱：28℃±1℃。

2.3 均质器。

2.4 恒温振荡器。

2.5 显微镜：10x～100x。

2.6 电子天平：感量0.1g。

2.7 无菌锥形瓶:容量500mL、250mL。

2.8 无菌广口瓶：500mL。

2.9 无菌吸管：1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)。

2.10 无菌平皿：直径90mm。

2.11 无菌试管：10mm×75mm。

2.12 无菌牛皮纸袋、塑料袋。

3 培养基和试剂

3.1 马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基。

3.2 孟加拉红培养基。

4 检验程序

霉菌和酵母计数的检验程序见图1。

图1霉菌和酵母计数的检验程序

5 操作步骤

5.1 样品的稀释

5.1.1 固体和半固体样品：称取25g样品至盛有225mL灭菌蒸馏水的锥形瓶中，充分振摇，即为1:10稀释液。或放入盛有225mL无菌蒸馏水的均质袋中，用拍击式均质器拍打2min,制成1:10的样品匀液。

5.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品至盛有225mL无菌蒸馏水的锥形瓶(可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。

5.1.3 取1mLl:10稀释液注入含有9mL无菌水的试管中，另换一支1mL无菌吸管反复吹吸,此液为1:100稀释液。

5.1.4 按5.1.3操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管。

5.1.5 根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液)，在进行10倍递增稀释的同时,每个稀释度分别吸取1mL样品匀液于2个无菌平皿内。同时分别取1mL样品稀释液加入2个无菌平皿作空白对照

5.1.6 及时将15mL~20mL冷却至46℃的马铃薯-葡萄糖-琼脂或孟加拉红培养基(可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。

5.2 培养

待琼脂凝固后，将平板倒置，28℃±1℃培养5d,观察并记录。

5.3 菌落计数

肉眼观察，必要时可用放大镜，记录各稀释倍数和相应的霉菌和酵母数。以菌落形成单位(colony forming units,CFU)表示。

选取菌落数在10CFU~150CFU的平板，根据菌落形态分别计数霉菌和酵母数。霉菌蔓延生长覆盖整个平板的可记录为多不可计。菌落数应采用两个平板的平均数。

6 结果与报告

6.1 计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数计算。

6.1.1 若所有平板上菌落数均大于150CFU,则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。

6.1.2 若所有平板上菌落数均小于10CFU,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。

6.1.3 若所有稀释度平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算；如为原液，则以小于1计数。

6.2 报告

6.2.1 菌落数在100以内时，按“四舍五入”原则修约，釆用两位有效数字报告。

6.2.2 菌落数大于或等于100时，前3位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2位数字，后面用0代替位数来表示结果；也可用10的指数形式来表示，此时也按“四舍五入”原则修约，采用两位有效数字。

6.2.3 称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告，报告或分别报告霉菌和/或酵母数。

相关链接：金黄色葡萄球菌MPN计数

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（二）》

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