7 检验程序

金黄色葡萄球菌平板计数程序见图2。

图2金黄色葡萄球菌Baird～Parker平板法检验程序

8 操作步骤

8.1 样品的稀释8.1.1固体和半固体样品：称取25g样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，
8000r/min～10000r/min均质1min～2min,或置盛有225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min,制成1:10的样品匀液。

8.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。

8.1.3 用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL,沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面)，振摇试管或换用1支1mL无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。

8.1.4 按8.1.3操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。

8.2 样品的接种

根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液)，在进行10倍递增稀释时，每个稀释度分别吸取1mL样品匀液以0.3mL、0.3mL、0.4mL接种量分别加入三块Baird-Parker平板,然后用无菌L棒涂布整个平板,注意不要触及平板边缘。使用前,如Baird-Parker平板表面有水珠，可放在25℃～50℃的培养箱里干燥，直到平板表面的水珠消失。

8.3 培养

8.3.1.1 在通常情况下，涂布后，将平板静置10min,如样液不易吸收，可将平板放在培养箱36℃±1℃培养1h；等样品匀液吸收后翻转平皿，倒置于培养箱，36℃±1℃培养，45h～48h。

8.4 典型菌落计数和确认

8.4.1 金黄色葡萄球菌在Baird-Parker平板上，菌落直径为2mm～3mm,颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落有似奶油至树胶样的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落；但无混浊带及透明圈。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。

8.4.2 选择有典型的金黄色葡萄球菌菌落的平板,且同一稀释度3个平板所有菌落数合计在20CFU～200CFU之间的平板，计数典型菌落数。如果：

a)只有一个稀释度平板的菌落数在20CFU~200CFU之间且有典型菌落，计数该稀释度平板上的典型菌落；

b)最低稀释度平板的菌落数小于20CFU且有典型菌落，计数该稀释度平板上的典型菌落；

c)某一稀释度平板的菌落数大于200CFU且有典型菌落，但下一稀释度平板上没有典型菌落，应计数该稀释度平板上的典型菌落；

d)某一稀释度平板的菌落数大于200CFU且有典型菌落，且下一稀释度平板上有典型菌落，但其平板上的菌落数不在20CFU~200CFU之间，应计数该稀释度平板上的典型菌落；以上按公式(1)计算。

e)2个连续稀释度的平板菌落数均在20CFU~200CFU之间，按公式(2)计算。

8.4.3 从典型菌落中任选5个菌落(小于5个全选)，分别按5.3.2做血浆凝固酶试验。

9 结果计算：

公式(1):

式中：

T—样品中金黄色葡萄球菌菌落数；

A—稀释度典型菌落的总数；

B—稀释度血浆凝固酶阳性的菌落数；

C—稀释度用于血浆凝固酶试验的菌落数；

d—稀释因子。

公式(2):

式中：

T—样品中金黄色葡萄球菌菌落数；

A₁—第一稀释度(低稀释倍数)典型菌落的总数；

A₂—第二稀释度(高稀释倍数)典型菌落的总数；

B₁—第一稀释度(低稀释倍数)血浆凝固酶阳性的菌落数；

B₂—第二稀释度(高稀释倍数)血浆凝固酶阳性的菌落数；

C₁—第一稀释度(低稀释倍数)用于血浆凝固酶试验的菌落数；

C₂—第二稀释度(高稀释倍数)用于血浆凝固酶试验的菌落数；

1.1—计算系数；

d—稀释因子(第一稀释度)。

10 结果与报告

根据Baird-Parke平板上金黄色葡萄球菌的典型菌落数，按9中公式计算，报告每g(mL)样品中金黄色葡萄球菌数，以CFU/g(mL)表示；如T值为0,则以小于1乘以最低稀释倍数报告。

相关链接：金黄色葡萄球菌定性检验

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（二）》

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