7 检验程序

大肠菌群平板计数法的检验程序见图2。

图2大肠菌群平板计数法检验程序

8 操作步骤

8.1 样品的稀释

按6.1进行。

8.2 平板计数

8.2.1 选取2个～3个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种2个无菌平皿，每皿1mL。同时取1 mL生理盐水加入无菌平皿作空白对照。

8.2.2 及时将15mL～20mL冷至46℃的结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)约倾注于每个平皿中。小心旋转平皿，将培养基与样液充分混匀，待琼脂凝固后，再加3mL～4mL VRBA覆盖平板表层。翻转平板，置于36℃±1℃培养18h～24h。

8.3 平板菌落数的选择

选取菌落数在15CFU～150CFU之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0.5mm或更大。

8.4 证实试验

从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于BGLB肉汤管内，36℃±1℃培养24h~48h,观察产气情况。凡BGLB肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。

8.5 大肠菌群平板计数的报告

经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以8.3中计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每g(mL)样品中大肠菌群数。例：10^-4样品稀释液1mL,在VRBA平板上有100个典型和可疑菌落，挑取其中10个接种BGLB肉汤管,证实有6个阳性管,则该样品的大肠菌群数为：100×6/10×10⁴/g(mL)=6.0×10⁵CFU/g(mL)。

相关链接：大肠菌群MPN计数法

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（二）》

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