1 范围

本标准规定了婴幼儿食品和乳品中左旋肉碱的测定方法。

本标准适用于婴幼儿食品和乳品中左旋肉碱的测定。

2 原理

试样经过水提取，用高氯酸沉淀蛋白质后过滤。滤液经碱皂化后使溶液中结合态的左旋肉碱游离出来。左旋肉碱与乙酰辅酶A在乙酰肉碱转移酶的催化下反应生成乙酰肉碱和游离的辅酶A。游离的辅酶A和2-硝基苯甲酸反应生成黄色物质，其颜色深浅与游离的辅酶A含量成正比。因游离的辅酶A与左旋肉碱是等摩尔反应关系，可间接求出试样中左旋肉碱含量。

3 试剂和材料

注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的三级水。

3.1 试剂

3.1.1 高氯酸(HClO₄)。

3.1.2 氢氧化钠(NaOH)。

3.1.3 氢氧化钾(KOH)。

3.1.4 2-硝基苯甲酸(C₁₄H₈N₂O₈S₂)。

3.1.5 N-2-羟乙基哌嗪-N-2-乙烷磺酸(C₈H₁₈N₂O₄S)。

3.1.6 乙二胺四乙酸二钠(C₁₀H₁₄N₂Na₂.2H₂O)。

3.1.7 乙酰辅酶A(AcetylCoA):在2℃～8℃保存。

3.1.8 乙酰肉碱转移酶(CAT):在2℃～8℃保存。

3.2 试剂配制

3.2.1 高氯酸溶液(13%):13mL高氯酸稀释至100mL。

3.2.2 氢氧化钠溶液(10mol/L):称取40g氢氧化钠用水溶解，冷却后稀释至100mL。

3.2.3 氢氧化钾溶液(4.0mol/L):称取22.4g氢氧化钾用水溶解，冷却后稀释至100mL。

3.2.4 显色储备液：分别称取50mg2-硝基苯甲酸、5.96g N-2-轻乙基哌嗪-N-2-乙烷磺酸、185mg乙二胺四乙酸二钠溶于30mL去离子水中，用10mol/L NaOH溶液调pH至7.4～7.6,然后用水定容至50mL。此液置于4℃冰箱中可保存3个月。

3.2.5 显色工作液：吸取5.0mL显色储备液用水定容至25mL。

3.2.6 乙酰辅酶A(AcetylCoA)溶液：称取20.0mg乙酰辅酶A溶于2.0mL水中。临用时配制。

3.2.7 乙酰肉碱转移酶(CAT)溶液：吸取100uL乙酰肉碱转移酶悬浮液，经1500r/min离心10min，弃去上层清液，沉淀用2mL水溶解。临用时配制。

3.3 标准品

左旋肉碱标准品(C₇H₁₅N0₃):纯度≥98%。

3.4 标准溶液配制

3.4.1 左旋肉碱标准储备液(80ug/mL):准确称取20mg(精确0.0001g)于102℃±2℃烘箱中烘2h的左旋肉碱，用水定容至250mL容量瓶中。此液置于4℃冰箱中可保存1个月。

3.4.2 左旋肉碱标准工作液：分别吸取左旋肉碱标准储备液0.5mL、1mL、2mL、3mL、5mL于25mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀。此溶液仅限于当天使用。

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（一）》

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