9 原理

试样中的胆碱用氢氧化钡-甲醇-三氯甲烷混合溶液水解抽提，经弗罗里硅土层析净化，与雷纳克铵盐溶液形成粉红色的胆碱雷纳克铵盐，用丙酮溶解洗脱，于526nm测定吸收值。在一定浓度范围内，胆碱雷纳克铵盐颜色的深浅与其含量成正比。

10 试剂和材料

注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的三级水。

10.1 试剂

10.1.1 弗罗里硅土：100目～200目，650℃活化。

10.1.2 甲醇(CH₃OH)。

10.1.3 三氯甲烷(CHC1₃)。

10.1.4 氢氧化钡［Ba(OH)₂.8H₂O］。

10.1.5 冰乙酸(CH₃COOH)。

10.1.6 乙酸甲酯(C₃H₆O₂)。

10.1.7 丙酮(CH₃COCH₃)。

10.1.8 雷纳克铵盐(C₄H₁₀CrN₇S₄)。

10.2 试剂配制

10.2.1 饱和氢氧化钡-甲醇-三氯甲烷溶液：称取6g氢氧化钡溶于100mL甲醇中，放入超声波中溶解后，加入10mL三氯甲烷，混匀。

10.2.2 冰乙酸-甲醇溶液(1+10)：1体积冰乙酸与10体积甲醇混合。

10.2.3 雷纳克铵盐溶液：称取0.25g雷纳克铵盐，加入10mL水中，放入超声波中溶解后过滤，临用时配制。

10.3 标准品

胆碱酒石酸氢盐(C₉H₁₉NO₇)：纯度≥99%。

10.4 标准溶液配制

胆碱酒石酸氢盐标准溶液(1g/L)：准确称取在102℃+2℃烘至恒重的胆碱酒石酸氢盐0.1000g,用蒸镏水定容至100mL容量瓶中。冷藏于4℃±2℃冰箱中，保存不超过一周。

11 仪器和设备

11.1 天平：感量为0.01g和0.1mg。

11.2 回流装置：250mL磨口锥形瓶及回流装置。

11.3 恒温水浴锅：温度可控制在79℃±2℃。

11.4 层析柱：长约10cm、内径1cm的带50mL杯口的玻璃柱。

11.5 分光光度计。

12 分析步骤

12.1 试样制备

称取固体试样10g(精确到0.01g),称取液体试样20g(精确到0.01g)于磨口锥形瓶中，加入50mL氢氧化钡-甲醇-三氯甲烷提取液。混合均匀后接入回流装置，于79±2℃的水浴锅内水解抽提4h。每隔1h震荡一次，以避免试样结块。水解抽提结束后，取出锥形瓶冷却至室温，过滤。滤渣用冰乙酸-甲醇混合液洗涤3次～4次，洗液一并收集于100mL容量瓶中。用甲醇定容至刻度，混匀。

12.2 标准曲线的绘制

12.2.1 层析柱制备

用乳胶管连接层析柱与滴头，用少量脱脂棉堵住层析柱底部，倒入约5cm左右高的弗罗里硅土，用甲醇浸湿，备用。

12.2.2 层析

分别吸取胆碱标准溶液0mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL注入层析柱中，当溶液完全进入柱床后，依次用5mL和10mL甲醇，20mL乙酸甲酯洗涤层析柱。再加入5mL雷纳克铵盐溶液，用适量的冰乙酸洗去过量的雷纳克铵盐，直至层析柱上无雷纳克铵盐附着处呈现硅土原有的白色。用丙酮洗脱粉红色的胆碱雷纳克铵盐，收集于10mL的容量瓶中，用丙酮定容(如果洗脱液混浊需过0.45um的滤膜)。在波长526nm处测定溶液的吸光值，以胆碱酒石酸氢盐含量为横坐标(mx),吸光值为纵坐标绘制标准曲线。

12.3 试样的测定

吸取10mL试样水解液(12.1)于层析柱中，其余操作按照12.2.2进行。自标准曲线上査得10mL试样水解液中胆碱酒石酸氢盐的含量。

13 分析结果的表述

试样中的胆碱以胆碱氢氧化物计，以毫克每百克(mg/100g)表示，按公式(3)计算：

式中：

X—试样中胆碱氢氧化物的含量，单位为毫克每目克(mg/100g)；

m—试样的质量，单位为克(g);

V—层析时吸取试样水解液的体积，单位为毫升(mL);

m_x—从标准曲线上查得胆碱酒石酸氢盐的含量，单位为毫克(mg)；

0.474——胆碱酒石酸氢盐转化为胆碱氢氧化物的系数。

计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留整数位。

14 精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

15 其他

方法检出限为2mg/100g,定量限为5mg/100g。

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（一）》

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