(1)引物／探针 引物／探针序列见表11—3，用TE缓冲液(pH 8.0)或重蒸水分别将表l1-3引物／探针稀释到10μmol／L。

(2)PCR检测

①对照设置 阴性对照以非转基因水稻DNA为模板；设置两个阳性对照，分别用转Bt基因抗虫水稻材料中提取的DNA，以及转Bt基因水稻含量为0.1％的水稻DNA作为PCR反应体系的模板；空白对照以重蒸馏水代替DNA模板。

②PCR反应体系 按表11—4配制PCR扩增反应体系，也可采用等效的实时荧光PCR反应试剂盒配制反应体系，每个试样和对照设3次重复。

③PCR反应 PCR反应按以下程序运行。

第一阶段95℃／10min；第二阶段95℃／15s、60℃／60s，循环数40；在第二阶段的退火延伸时段收集荧光值，PCR反应结束后，根据收集的荧光曲线和Ct值判定结果。

(3)结果分析 阈值设定：实时荧光PCR反应结束后，设置荧光信号阈值，阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。

质量控制：在内源参照基因SPS和GOS基因扩增时，空白荧光曲线平直，阴性对照和阳性对照出现典型的扩增曲线，或空白对照荧光值低于阴性对照和阳性对照荧光值的15％；在外源基因(序列)国MV35S、NOS和Bt扩增时，空白对照和阴性对照的荧光曲线平直，阳性对照出现典型的扩增曲线，或空白对照和阴性对照的荧光值低于阳性对照荧光值的15％，表明反应体系工作正常。否则，表明PCR反应体系不正常，需要查找原因重新检测。

结果判定：在PCR反应体系正常工作的前提下，待测样品基因(序列)检测Ct值大于或等于40，则判定样品未检出该基因(序列)；待测样品基因(序列)出现典型的扩增曲线，且检测Ct值小于或等于阳性对照的Ct值，则判定样品检出该基因(序列)：待测样品,基因(序列)出现典型的扩增曲线，检测Ct值大于阳性对照的Ct值但小于40，应进行重复实验，如重复实验的外源基因(序列)出现典型的扩增曲线，且检测Ct值小于40，则判定样品检出该基因(序列)。

结果表述

①在试样的PCR反应中，未检出SPS基因和／或GOS基因．结果表述为“样品中未检出水稻成分”。

②在试样PCR反应中，检出Bt基因，对于水稻及以水稻为唯一乐辩的产品。结果表述为“样品中检出转Bt基因水稻成分”；对于混合原料产品．结果表述为。样品中检出西基因”，需要进一步对加工原料进行检测确认。

③在试样PCR反应中，未检出Bt基因，但检CaMV35S启动子和．。或NOS终止子，表明该样品含有转基因成分，结果表述为“样品中检出CaMV35S启动子和/或NOS终止子，未检出转Bt基因水稻成分”。④在试样PCR反应中，检出水稻内标准基因，但未检出Bt基因、CaMV 35S启动子和NOS终止子，结果表述为“样品中未检出转Bt基因水稻成分”。