北京普天同创生物科技有限公司
5 仪器和设备
5.1 高效液相色谱-质谱/质谱仪:配有电喷雾离子源。
5.2 天平:感量为0.0001g和0.01g
5.3 固相萃取装置。
5.4 离心机:大于等于6000r/min。
5.5 pH计:测量精度±0.02 pH单位。
5.6 旋涡混合器。
5.7 减压浓缩仪。
5.8 具塞离心管:聚四氟乙烯,50 mL。
6 试样制备与保存
6.1 取500 g代表性蜂王浆样品,在室温下解冻,等样品全部融化后搅匀,将试样均分成两份,分别装入样品瓶中,密封,并标明标记。一份作为试验样,另一份在-18℃保存。
6.2 在制样的操作过程中,应防止样品污染或发生残留物含量的变化。
7 测定步骤
7.1 提取
称取2g试样(精确到0.01g)置于50 mL具塞离心管中,加0.2 mL 二甲硝咪唑-D3、洛硝哒唑-D3同位素内标溶液(200 ng/mL),羟基二甲硝咪唑-D3,羟基异丙硝唑-D3、异丙硝唑-D3同位素内标溶液(100 ng/mL),加10 mL水,混匀,静置2 min,再加甲醇至20 mL,于旋涡混合器上以2000r/min混匀1 min,以6000r/min离心10 min,移取10.0 mL上清液,加10 mL磷酸盐缓冲溶液(4.9)稀释,混匀,加2g氯化钠和20 mL乙酸乙酯提取,于旋涡混合器上以2000r/min,混匀1 min,以6 000 r/min离心5 min,将上层乙酸乙酯收集于浓缩瓶中,样品残渣再加20 mL乙酸乙酯,重复上述操作,合并乙酸乙酯提取溶液,在45℃以下水浴减压浓缩至近干。
7.2 净化
加15 mL水分次溶解残渣并将溶液转移至HLB固相萃取小柱中(4.16),弃去流出液,抽干,用6 mL甲醇洗脱,控制流速1 mL/min~2 mL/min,收集全部洗脱液并将溶液转移至C18固相萃取小柱中(4.17),再加9 mL甲醇洗脱,控制流速1 mL/min~2 mL/min,收集全部流出液,洗脱液在50℃以下水浴中减压浓缩至近干,用1.0 mL甲醇-0.15%甲酸溶液(1+9,体积比)溶解残渣,混匀,溶液过0.45 um,滤膜,供液相色谱-质谱/质谱仪测定。
7.3 测定
7.3.1 液相色谱-串联质谱条件
a)色谱柱:C8 柱,150 mm×4.6mm(内径),5 um或相当者;
b)流动相梯度洗脱程序见表1;
表1 梯度洗脱程序
c)流速:0.4 mL/min;
d)进样量:30 uL;
e)离子源:电喷雾离子源;
f)扫描方式:正离子扫描;
g)检测方式:多反应监测;
h)雾化气压力(GSl)、气帘气压力(CUR)、辅助气流速(GS2)均为高纯氮气或其他合适气体;使用前应调节各气体流量以及离子源温度(TEM)使质谱灵敏度达到检测要求。
文章来源:《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》
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