5 分析步骤

5.1 阴性对照和阳性对照溶液的准备

5.1.1 阴性对照溶液的配制：取试剂盒中阴性对照奶粉(4.2.2)约13 g加40℃温水100 mL溶解，放置在0℃～4℃冰浴中待测。

5.1.2 阳性对照溶液的配制：用稀释好的阴性对照溶液(5.1.1)50 mL稀释阳性对照品(4.2.3)，溶解后的阳性对照液中含4 ug/L的青霉素G，或者在阴性牛奶样品中加入一定量青霉素G，使之浓度为4 ug/L。放置在0℃～4℃冰浴中待测。

5.2 样品的前处理

5.2.1 液态奶：取20 mL牛奶，1750g离心5 min，除去上层脂肪层。冰浴冷却至0℃～4℃待测。

5.2.2 奶粉、乳清粉：称取4.0g样品，加水28 mL溶解。冰浴冷却至0℃～4℃待测。

5.3 检测

5.3.1 取出检测试剂药片，用药片压杆将受体试剂药片(4.2.1.1)加入硅硼酸盐玻璃试管中。

5.3.2 加入300uL水，用涡旋混合器振荡约10 s，将药片溶解。

5.3.3 将5.0mL牛奶样品(5.2)，或阴性对照溶液(5.1.1)或阳性对照溶液(5.1.2)加入试管中，在涡旋混合器上振荡10 s，使之混匀。

5.3.4 置于恒温加热器中65℃±2℃温育2 min。

5.3.5 从恒温加热器中取出试管，立即用药片压杆将[¹⁴C]标记的青霉素G药片(4.2.1.2)压入试管中，在涡旋混合器上振荡10 s，上下来回10次。

5.3.6 置于恒温加热器中65℃±2℃保温2 min。

5.3.7 取出试管，1750 g，离心3 min；立即从离心机中取出试管，倾去上清液。

5.3.8 倒置，用棉签擦去试管内脂肪环并吸干液体，注意勿触及沉淀物。

5.3.9 加300uL水，用涡旋混合器混匀，将沉淀物打碎。

5.3.10 加3.0 mL闪烁液(4.2.4)至试管中，盖上试管塞，涡旋混匀。

5.3.11 在液体闪烁计数分析仪的[¹⁴C]频道进行60s LSC计数，打印计数结果。

5.4 控制点的确定

5.4.1 控制点是判断样品阴性与初筛阳性的一个界定值。正常情况下，新批号应设定一个新的控制点。

5.4.2 按方法5.3测定6个非重复的阴性对照溶液(5.1.1)的计数值，求出平均值乘上系数0.8，即为筛选水平的控制点。

5.5 结果判定

5.5.1 当样品的cpm值大于控制点时，判定为“阴性”。即样本中β-内酰胺类含量低于筛选水平。

5.5.2 当样品的cpm值等于或小于控制点，视为“初筛怀疑阳性”，此时应重新测定样品、阴性对照液和阳性对照液的cpm值。当阴性对照液和阳性对照液的cpm值在正常范围波动，样本测试结果cpm值大于控制点，判定为“阴性”；若样本cpm值仍等于或小于控制点，则判定样品为“筛选阳性”。

6 确证试验

被测样品中β-内酰胺类抗生素残留筛选结果为初筛阳性的，应用其他方法进行确证。

7 检测限

检测限见表1。

表1 检测限

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文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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