5 检测步骤

5.1 阴性对照和阳性对照溶液的准备

5.1.1 阴性对照溶液的配制：取试剂盒中阴性对照奶粉(4.2.2)约13g加10℃温水100 mL溶解，放置在0℃～4℃冰浴中待测。

5.1.2 阳性对照溶液的配制：在阴性对照溶液(5.1.1)中加入土霉素标准品，溶解后的阳性对照液中含30 ug/L，的土霉素。放置在0℃～4℃冰浴中待测。

5.2 样品前处理

5.2.1 液态奶：取20 mL牛奶，3400r/min离心5 min，除去上层脂肪层。冰浴至0℃～4℃待测。

5.2.2 奶粉、乳清粉：称取4.0g样品，加水28 mL溶解。冰浴至0℃～4℃待测。

5.3 检测

5.3.1 取出检测试剂片，将受体试剂药片(4.2.1.1)加入硅硼酸盐玻璃试管中。

5.3.2 加入300uL水，置于涡旋混合器上振荡10 s将药片溶解。

5.3.3 将5 mL牛奶样品，或阴性对照溶液(5.1.1)或阳性对照溶液(5.1.2)加入试管中，在涡旋混合器上振荡10 s，使之混匀。

5.3.4 加[³H]标记的四环素药片(4.2.1.2)，在涡旋混合器上振荡10 s，使之混匀。

5.3.5 置于恒温加热器中35℃±2℃保温3 min。

5.3.6 取出试管，3400r/min，离心5 min；立即从离心机中取出试管，弃去上层液体。

5.3.7 倒置，用棉签擦去脂肪环并吸干液体，注意勿触及沉淀物。

5.3.8 加300uL水，混匀，将沉淀物在涡旋混合器上打碎。

5.3.9 加3.0mL闪烁液(4.2.4)至试管中，盖上盖子。在涡旋混合器七混匀。

5.3.10 在液体闪烁计数分析仪的[³H]频道进行60 s LSC计数，打印计数结果。

5.4 控制点的确定

5.4.1 控制点是判断样品阴性与初筛阳性的一个界定值，可根据筛选水平自行设定。正常情况下，新批号应设定一个新的控制点。

5.4.2 按方法5.3测定6个非重复的阳性对照溶液(5.1.2)(含土霉素30 ug/kg)的计数值，求出平均值乘上系数1.23，即为筛选水平的控制点。

5.4.3 若筛选水平确定为100 ug/kg(以土霉素计)，初筛阳性样品可以用阴性对照液(5.1.1)稀释3倍(一份样品加入2份阴性牛奶)测定cpm值，将测定后的cpm值与控制点比较。

5.5 结果判定

5.5.1 当样品的cpm值大于控制点时，判定为“阴性”。即样本中四环素类含量低于筛选水平。

5.5.2 当样品的cpm值等于或小于控制点，视为“初筛怀疑阳性”，此时应重新测定样品、阴性对照液和阳性对照液的cpm值；当阴性对照液和阳性对照液的cpm值在正常范围波动，样本测试结果cpm值大于控制点，判定为“阴性”；若样本cpm值仍等于或小于控制点，则判定样品为，‘筛选阳性”。

6 确证试验

如被测样品中四环素类抗生素残留筛选结果为初筛阳性的，应用其他方法进行确证。

7 检测限

检测限见表1。

表1 检测限

相关链接：进出口乳及乳制品中四环素类药物残留检测方法（一）

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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