北京普天同创生物科技有限公司
1 范围
本标准规定了动物源性食品中氮哌酮及其代谢产物氮哌醇残留量检测的气相色谱-质谱测定方法。
本标准适用于猪肉和猪肾中氮哌酮及其代谢产物氮哌醇残留量的测定和确证。
2 方法提要
试样用乙腈提取,经C18 SPE柱净化,酸性乙腈洗脱,正己烷液液分配,叔丁基甲醚萃取后,氮哌醇再经硅烷化衍生,用气相色谱-质谱法测定,内标法定量。
3 试剂和材料
除另有规定外,所用试剂均为分析纯,水为蒸馏水。
3.1 甲醇:液相色谱纯。
3.2 正己烷:液相色谱纯。
3.3 乙腈:液相色谱纯。
3.4 乙酸乙酯:液相色谱纯。
3.5 叔丁基甲醚:液相色谱纯。
3.6 硫酸:98%。
3.7 氢氧化钠。
3.8 氯化钠。
3.9 10%氯化钠溶液:称取100 g氯化钠溶于适量水中,并用水定容至1L。
3.10 硫酸溶液:将28 mL硫酸(3.6)缓缓加入装有500 mL水的烧杯中,混匀冷却至室温备用。
3.11 0.01mol/L硫酸溶液:移取20 mL硫酸溶液(3.10)至装有250 mL水的1 L量杯中,加水至1L。
3.12 0.05 mol/L硫酸溶液:移取100 mL硫酸溶液(3.10)至装有250 mL水的1 L量杯中,加水至1L。
3.13 酸性乙腈溶液:在100 mL乙腈中加入1 mL 0.05 mol/L硫酸溶液(3.12)。
3.14 0.5 mol/L氢氧化钠溶液:称取20 g氢氧化钠溶于适量水,并用水定容至1 L。
3.15 乙腈饱和正己烷溶液:取100 mL正己烷,30 mL乙腈于分液漏斗中,振荡混匀,待用。
3.16 衍生化试剂:双三甲基硅基三氟乙酰胺(BSTFA)-三甲基氯硅烷(TMCS) (99+1,体积比)。
3.17 2,3,4-2',4',5'-六氯联苯(PCB138):纯度大于等于98%。
3.18 内标溶液:用乙酸乙酯配制2,3,4-2',4',5'-六氯联苯(PCB138 )浓度为0.10 ug/mL。
3.19 氮哌酮标准品(Azaperone, CAS号:1649-18-9,分子式:C19H22FN3O):纯度大于等于98%。
3.20 氮哌醇(Azaperol,CAS号:2804-05-9,分子式:C19H24FN3O)标准溶液:10 us/mL甲醇溶液,在-18℃下避光保存。
3.21 氮哌酮标准储备溶液:准确称取适量氮哌酮标准品,用甲醇配制成浓度为10 ug/mL的标准储备液,在-18℃下避光保存,有效期半年。
3.22 混合标准工作溶液:各准确移取0.50 mL氮哌醇标准溶液(3.20)和氮哌酮标准储备溶液(3.21)于10 mL棕色容量瓶并用甲醇定容,溶液浓度约为0.5 ug/mL。在-18℃下避光保存,有效期3个月。
3.23 C18 SPE柱:Sep Pak Vac 1 g, 6 mL或相当者。
4 仪器和设备
4.1 气相色谱-质谱仪:四极杆质谱仪,配有El源并具有选择离子功能。
4.2 分析天平:感量0.1mg和0.01g。
4.3 旋涡混匀器。
4.4 组织捣碎机。
4.5 旋转蒸发器。
4.6 固相萃取装置。
4.7 离心机:转速不低于4000r/min,配有10 mL和50 mL塑料离心管。
4.8 氮气吹干仪。
4.9 超声波水浴。
5 试样制备与保存
5.1 试样制备
从所取全部样品中取出有代表性样品约500 g,充分捣碎均质,均分成两份,分别装入洁净容器内。密封作为试样,标明标记。
5.2 试样保存
将试样于-18℃以下保存。
在制样的操作过程中,应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。
6 测定步骤
6.1 提取
称取约5g均匀试样(精确到0.01g),置于50 mL塑料离心瓶中,加20 mL乙腈,置于旋涡混匀器上涡旋混匀45 s,再超声提取10 min, 4000r/min离心10 min。吸取10 mL上层乙腈溶液至一已存放50 mL 10%氯化钠溶液(3.9)的玻璃瓶中,混匀,置0℃~4℃存放约0.5h,待净化。
6.2 净化
将C18 SPE柱(3.23)安装到固相萃取装置上,用 10 mL甲醇和10 mL水活化,加入上述提取液(6.1),控制流速2滴/s,用1 mL 0.01 mol/L硫酸溶液(3.11)淋洗,并排干柱中液体,再用3 mL酸性乙腈溶液(3.13)洗脱并收集于10 mL塑料离心管中,于40℃下用氮气吹至约300 mL。立即加1 mL乙腈饱和的正己烷(3.15),并在旋涡混匀器上高速混匀30 s后,4000r/min离心3 min,弃去正己烷层,再加1 mL乙腈饱和的正己烷重复操作一次。残留溶液加入150uL 0.5 mol/L氢氧化钠溶液(3.14),调节pH至10,慢慢加入1 mL叔丁基甲醚,旋涡混匀30 s后,4000r/min离心3 min,移取上层有机相至一玻璃小试管中,再用2×1mL、叔丁基甲醚重复提取2次,合并提取液于30℃下用氮气吹干。
6.3 衍生化
用200uL甲醇溶解残渣并转移至衍生瓶中,再重复操作一次,合并溶液。同时吸取0 uL、50uL、100 uL、200 uL、400uL、800 uL混合标准使用溶液(3.22)于另一系列衍生瓶中。同步把样品提取液和混合标准溶液在30℃下用氮气吹干,加入100 uL衍生化试剂(3.16),混匀,于70℃烘箱内衍生20 min,冷却后用氮气吹干,加100 uL内标溶液(3.18)溶解残渣,供气相色谱-质谱测定。
文章来源:《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》
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