2.4.3 测定

2.4.3.1 液相色谱-质谱/质谱条件

a)色谱柱：柱填料为十八烷基硅烷键合相的色谱柱，2.1×150 mm, 5 um或相当者；

b)流动相：梯度洗脱程序见表1;

c)流速：0.20 mL/min;

d)柱温：40℃；

e)进样量：10 uL;

f)离子源：电喷雾离子源；

g)扫描方式：正离子；

h)检测方式：多反应监测(MRM) ;

i)雾化气、窗帘气、辅助加热气、碰撞气等气体使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求;

j)喷雾电压、去集簇电压、碰撞能等电压值应优化至最优灵敏度;

k)监测离子对(m/z)：他达那非390.4/268.3(定量离子对)、390.4/135.1、390.4/169.1；西地那非475.3/100.1(定量离子对)、475.3/58.0、475.3/311.4；伐地那非489.5/151.1(定量离子对)498.5/72.1、489.5/312.1。

表1 流动相梯度洗脱程序

2.4.3.2 液相色谱-质谱/质谱测定

按照2.4.3.1液相色谱-质谱/质谱条件测定样液和标准工作溶液，标准曲线法测定样液中的伐地那非、西地那非、他达那非含量。样液中被测物的响应值应在仪器线性范围之内，如果超出仪器线性范围，应用0.1mol/L，盐酸＋甲醇混合液(2.2.5)进行适当稀释。在上述色谱条件下，伐地那非、西地那非、他达那非的质量色谱峰保留时间约为10.5 min、10.7 min、12.4 min。

在相同的实验条件下，样液中被测物的质量色谱峰保留时间与标准工作溶液一致，并且在扣除背景后的样品色谱图中，所选择的离子对均出现，各定性离子的相对丰度与浓度相当的标准溶液的离子相对丰度一致，误差不超过表2规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。

表2 定性确证时相对离子丰度的最大允许误差

2.4.3.3 空白试验

除不加试样外，均按上述测定步骤进行。

2.5 结果计算和表述

用液相色谱-质谱/质谱数据处理机或按照式(1)计算样品中伐地那非、西地那非、他达那非含量，计算结果需扣除空白。

式中：

X—试样中伐地那非、西地那非、他达那非的含量，单位为毫克每千克(mg/kg)或者毫克每升(mg/L)；

A—样液中伐地那非、西地那非、他达那非的峰面积或峰高；

c_s—标准工作液中伐地那非、西地那非、他达那非的浓度，单位为微克每毫升(ug/mL);

A_s—标准工作液中伐地那非、西地那非、他达那非的峰面积或峰高；

V—样液最终定容体积，单位为毫升(mL) ;

A_c—空白实验液中伐地那非、西地那非、他达那非的峰面积或峰高；

m—最终样液所代表的试样质量，单位为克(g)或者所代表的试样体积单位为毫升(mL)。

3 测定低限、回收率

3.1 测定低限

本方法片剂、胶囊剂样品中伐地那非、西地那非、他达那非的测定低限均为1.0 mg/kg;测定口服溶液剂样品中伐地那非、西地那非、他达那非的测定低限均为0.010mg/L。

3.2 回收率

3.2.1 保健食品中伐地那非添加浓度及其回收率数据

片剂、胶囊剂添加浓度在1.0 mg/kg～10 mg/kg时，回收率在89.3％～104％之间。

口服溶液添加浓度在0.010 mg/L～0.10 mg/L时，回收率在94.5％～114％之间。

3.2.2 保健食品中西地那非添加浓度及其回收率数据

片剂、胶囊剂添加浓度在1.0 mg/kg～10 mg/kg时，回收率在83.8％～101％之间。

口服溶液添加浓度在0.010 mg/L～0.10 mg/L时，回收率在85.4％～108％之间。

3.2.3 保健食品中他达那非添加浓度及其回收率数据

片剂、胶囊剂添加浓度在1.0 mg/kg～10mg/kg时，回收率在81.5％～108％之间。

口服溶液添加浓度在0.010 mg/L～0.10mg/L时，回收率在85.7％～100％之间。

相关链接：进出口保健食品中伐地那非、西地那非、他达那非的检测方法（一）

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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