北京普天同创生物科技有限公司
1 范围
本标准规定了动物源食品中氯霉素残留量的液相色谱串联质谱测定方法。
本标准适用于虾、鱼、禽肉、肠衣和蜂蜜中氯霉素残留量的检测。
2 测定方法
2.1 方法提要
用乙酸乙酯提取样品中氯霉素,正己烷脱脂,C18固相萃取小柱净化,用液相色谱-串联质谱测定和确证,同位素内标法定量。
2.2 试剂和材料
除另有规定外,听有试剂均为分析纯,水为二次蒸馏水。
2.2.1 乙酸乙酯:高效液相色谱级。
2.2.2 正己烷:高效液相色谱级。
2.2.3 甲醇:高效液相色谱级。
2.2.4 氯化钠。
2.2.5 无水硫酸钠:650℃灼烧1h,在干燥器内冷却至室温,贮于密封瓶中备用。
2.2.6 15%氯化钠水溶液:15 g氯化钠溶解于100 mL水中。
2.2.7 甲醇,水(2.8体积比)。
2.2.8 氯霉素标准品((clllorarriphenicol.CAS NO.56-75-7,C11H12Cl2N2O5):纯度大于等于99%。
2.2.9 氯霉素-d5标准品:纯度大于等于99%。
2.2.10 氯霉素标准储备溶液:称取0.010 0g标准品(2.2.8),用甲醇溶解定容至100 mL,溶液浓度为100 ug/mL。1℃~4℃冷藏保存。
2.2.11 氯霉素-d5标准储备溶液:称取0.0100g标准品(2.2.9),用甲醇溶解定容至100 mL,溶液浓度为100 ug/mL。 1℃~4℃冷藏保存。
2.2.12 标准工作曲线工作液:用甲醇:水(1:1,体积比)稀释氯霉素标准储备溶液,5点工作曲线的浓度分别为0.05 ng/mL、0.1ng/mL、0.4 ng/mL、0.8 ng/mL、1.2 ng/mL,氯霉素-d5作为同位素内标浓度为0.2 ng/mL。
2.3 仪器和设备
2.3.1 液相色谱-串联质谱仪:配有电喷雾离子源。
2.3.2 旋转蒸发器。
2.3.3 粉碎机。
2.3.4 均质器。
2.3.5 旋涡混合器。
2.3.6 固相萃取柱:C18固相萃取小柱,500 mg,或相当者。甲醇和水各5 mL预洗。
2.3.7 无水硫酸钠柱:80 mm×40 mni(内径)筒形漏斗.底部垫5 mm脱脂棉,再装50 mm无水硫酸钠。
2.4 测定步骤
2.4.1 制样
a)虾、鱼、禽肉、肠衣:从所取全部虾、鱼或禽肉样品中取出有代表性样品约500 g,用粉碎机粉碎;从所取肠衣样品中取出有代表性样品约300 g,用剪刀剪碎,混合均匀,均分成两份,分别装入洁净容器作为试样,密封,并标明标记。将试样于-18℃冷冻保存。
b)蜂蜜:取500 g代表性蜂蜜样品,未结晶的样品将其用力搅拌均匀,有结晶析出的样品可将样品瓶盖塞紧后,置于不超过60℃的水浴中温热,等样品全部熔化后搅匀,迅速冷却至室温。在熔化时应注意防止水分挥发。制备好的试样均分成两份,分别装入样品瓶中,密封,并标明标记。将试样室温下保存。在抽样和制样的操作过程中,应防止样品污染或发生残留物含量的变化。
2.4.2 提取
a)虾、鱼、禽肉:称取5 g试样(精确到0.01g)置于50 ml,具塞离心管中,准确加入0.1 mL氯霉素-d5(10 ng/mL)内标溶液,加25 mL 乙酸乙酯,在均质器中以14000r/min均质30 s,以3000 r/min离心5 min,将上层乙酸乙酯提取液过无水硫酸钠柱(2.3.7),收集于浓缩瓶中,样品残渣再加入20 mL、乙酸乙酯,重复上述操作,合并乙酸乙酯提取溶液,在50℃以下水浴减压浓缩至近干,用4 mL正己烷和4 mL水依次将残渣转移至10 mL具塞玻璃离心管中,于旋涡混合器上以2000r/min,混匀1 min,以2000r/min离心3 min,弃去上层正己烷溶液,再加入4 mL正己烷,重复上述操作。
b)肠衣:称取5g试样(精确到0.01g)置于50 mL 具塞离心管中,准确加入0.1mL氯霉素-d5(10 ng/mL)内标溶液,加25 mL、乙酸乙酯,于旋涡混合器上以2 000 r/min,混匀1 min,按上述方法操作。
c)蜂蜜:称取5 g试样(精确到0.01g)置于50 mL具塞离心管中,准确加入0.1 mL氯霉素-d5(10 ng/mL)内标溶液,加15 mL 15%氯化钠水溶液(2.2.6),加25 mL 乙酸乙酯,于旋涡混合器上以2000r/min,混匀1 min,以3000r/min离心5 min,将上层乙酸乙酯提取液过无水硫酸钠柱(2.3.7),收集于浓缩瓶中,样品残渣再加入20 mL乙酸乙酯,重复上述操作,合并乙酸乙酯提取溶液。在50℃以下水浴减压浓缩至近干。用4 mL水溶解残渣。
2.4.3 净化
将水层转移至C18固相萃取柱(2.3.6),再用10 mL水分两次洗涤,洗涤液过C18固相萃取柱,弃去流出液,再用5 mL甲醇水溶液(2.2.7)洗涤,负压抽干,6 mL甲醇洗脱,收集全部洗脱液,用氮气吹至约2.5 mL,加水定容至5.0mL,混匀,供液相色谱-串联质谱仪测定。
相关链接:进出口动物源食品中19-去甲睾酮残留量的测定方法(二)
文章来源:《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》
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