结果计算

X=0.0004*V1*D/V2*1000/m

式中 X——试样中黄曲霉毒素B1的含量，µg／kg；

V_l——加入苯一乙腈混合液的体积，mL；

V₂——出现最低荧光时滴加样液的体积，mL；

D一一样液的总稀释倍数；

m——加入苯乙腈混合液溶解时相当试样的质量，g；

0.0004——黄曲霉毒素B1的最低检出量，µg。

5．试剂

①三氯甲烷。

②正己烷或石油醚(沸程30-60℃或60-90℃)。

③甲醇。

④苯。

⑤乙腈。

⑥无水乙醚或乙醚经无水硫酸钠脱水。

⑦丙酮。

以上试剂在试验时先进行一次试剂空白试验，如不干扰测定即可使用，否则需逐一进行重蒸。

⑧硅胶G：薄层色谱用。

⑨三氟乙酸。

⑩无水硫酸钠。

⑥氯化钠。

⑩苯一腈混合液：量取98mL苯，加2mL乙腈，混匀。

⑩甲醇水溶液(55+45)。

⑩黄曲霉毒素B1标准溶液。

a．仪器校正 测定重铬酸钾溶液的摩尔消光系数，以求出使用仪器的校正因素。准确称取25mg经干燥的重铬酸钾(基准级)，用硫酸(O.5+1000)溶解后并准确稀释至
200mL。相当于[c(K2Cr2O7)一O.0004mol／L]。再吸取25mL此稀释液于50mL容量瓶中，加硫酸(0.5+1000)稀释至刻度，相当于0.0002mol／L溶液。再吸取25mL此稀释溶液于50mL容量瓶中，加硫酸(0.5+1000)稀释至刻度，相当于0.0001mol／L溶液。用lcm石英比色皿，在最大吸收峰的波长(接近350nm)处用硫酸(0.5+1000)作空白，测得以上
三种不同浓度的摩尔溶液的吸光度，并按下式计算以上三种浓度浓液的摩尔消光系数的平均值。

E_l=A／c

式中 E₁——重铬酸钾溶液的摩尔消光系数；

A——测得重铬酸钾溶液的吸光度；

c一一重铬酸钾溶液的摩尔浓度。

再以此平均值与重铬酸钾的摩尔消光系数值3160比较，即求出使用仪器的校正因素。

f=3160/E

式中 f——使用仪器的校正因素；

E——测得的重铬酸钾摩尔消光系数平均值。

若f大于0.95或小于1.05，则使用仪器的校正因素可忽略不计。

b．黄曲霉毒素B1标准溶液的制备 准确称取1.O～1.2mg黄曲霉毒素B1标准品，先加入2mL乙腈溶解后，再用苯稀释至lOOmL，避光，置于4℃冰箱内保存。该标准溶液约为10µg／mL。用紫外分光光度计测此标准溶液的最大吸收峰的波长及该波长的吸光度值。

结果计算

X=A*M*1000*f/E₂

式中 X——黄曲霉毒素B1标准溶液的浓度，µg／mL；

A----测得的吸光度值；

f---使用仪器的校正因素；

M——黄曲霉毒素B1的相对分子质量312；

E₂——黄曲霉毒素B1在苯-乙腈混合液中的摩尔消光系数19800。

根据计算，用苯一乙腈混合液调到标准溶液浓度恰为lO.0µg／mL，并用分光光度计核对其浓度。

c．纯度的测定 取5µL 10µg／mL黄曲霉毒素Bl标准溶液，滴加于涂层厚度0．25mm的硅胶G薄层板上，用甲醇三氯甲烷(4+96)与丙酮三氯甲烷(8+92)展开剂展开，在
紫外灯下观察荧光的产生，应符合以下条件：在展开后，只有单一的荧光点，无其他杂质荧光点；原点上没有任何残留的荧光物质。

⑥黄曲霉毒素B1标准使用液 准确吸取1mL标准溶液(10µg／mL)于10ml。容量瓶中，加苯一乙腈混合液至刻度，混匀。此溶液每毫升含1.0µg黄曲霉毒素B1，吸取1. 0ml此稀释液，置于5mL容量瓶中，加苯一乙腈混合液稀释至刻度，此溶液每毫升含0．2µg黄曲霉毒素B1。再吸取黄曲霉毒素Bl标准溶液(O.2µg／mL)1.OmL置于5mL容量瓶中，加苯一乙腈混合液稀释至刻度。此溶液每毫升含O.04µg黄曲霉毒素B1。

⑩次氯酸钠溶液(消毒用) 取100g漂白粉，加入500mL水，搅拌均匀。另将80g工业用碳酸钠(Na₂CO₃·10H₂O)溶于500mL温水中，再将两液混合、搅拌，澄清后过滤。
此滤液含次氯酸钠浓度约为25g／L。若用漂粉精制备，则碳酸钠的量可以加倍。所得溶液的浓度约为50g／L。污染的玻璃仪器用10g／L次氯酸钠溶液浸泡半天或用50g／L次氯酸钠溶液浸泡片刻后，即可达到去毒效果。

6．仪器

①小型粉碎机。

②样筛。

③电动振荡器。

④全玻璃浓缩器。

⑤玻璃板：5cm×20cm。

⑥薄层板涂布器。

⑦展开槽：内长25cm、宽6cm、高4cm。

⑧紫外灯：100～125w，带有波长365nm滤光片。

⑨微量注射器或血色素吸管。