(一)原理

利用自样品中提取出来的山梨酸及其盐类，在硫酸及重铬酸钾的氧化作用下产生丙二醛，丙二醛与硫代巴比妥酸作用产生红色化合物，其红色深浅与丙二醛浓度成正比，并于波长530nm处有最大吸收，符合比尔定律，故可用比色法测定：

(二)仪器和试剂

1．仪器

(1)721型分光光度计。

(2)组织捣碎机。

(3)10mL比色管。

2．试剂

(1)硫代巴比妥酸溶液：准确称取O.5g硫代巴比妥酸于100ml。容量瓶中，加20mL蒸馏水，然后再加入10mL氢氧化钠溶液(1mol／L)，充分摇匀。使之完全溶解后再加入11ml。盐酸(1mol/L)，用水稀释至刻度。此溶液要在使用时新配制，最好在配制后不超过6h内使用。

(2)重铬酸钾一硫酸混合液：以O.1 mol／L重铬酸钾和O.15mol/l硫酸以1：1的比例混合均匀配制备用。

(3)山梨酸钾标准溶液：准确称取250mg山梨酸钾于250ml，容量瓶中，用蒸馏水溶解并稀释至刻度，使之成为1mg/mL的山梨酸钾标准溶液。

(4)山梨酸钾标准使用溶液：准确移取山梨酸钾标准溶液25mL，于250 mL容量瓶中，稀释至刻度，充分摇匀，使之成为O.1 mg/mL的山梨酸钾标准使用溶液。

(三)操作步骤

1．样品的处理

称取100g样品，加蒸馏水200mL，于组织捣碎机中捣成匀浆。称取此匀浆100g，加蒸馏水200mL，继续捣碎1min，称取10g于250mL容量瓶中定容摇匀，过滤备用。

2．山梨酸钾标准曲线的绘制

分别吸取O．O、2．0、4．O、6．O、8．O、10．O mL山梨酸钾标准使用溶液于200 mL容量瓶中，以蒸馏水定容(分别相当于O．O、1．O、2．0、3．O、4．0、5．O／µg／ml的山梨酸钾)。再分别吸取2.OmL于相应的10mL比色管中，加2.OmL重铬酸钾一硫酸溶液,于100℃水浴中加热7min，立即加入2.OmL硫代巴比妥酸溶液，继续加热10min,立即取出迅速用冷水冷却，在分光光度计上以530nm测定吸光度，并绘制标准曲线。

3．样品的测定

吸取样品处理液2mL于10mL比色管中，按标准曲线绘制的操作程序，自“加2.0 mL重铬酸钾一硫酸溶液……”开始依次进行操作，在分光光计530nm处测定吸光度，从标准曲线中查出相应浓度。

(四)结果计算

样品中山梨酸钾的含量按以下公式进行计算。

X=c*250/m*2

式中：X——样品中山梨酸钾的含量，g／kg；

c——试样液中含山梨酸钾的浓度，mg／mL；

250——样品处理液总体积，mL；

m——称取匀浆相当于试样的质量，g；

2——用于比色时试样溶液的体积，mL。

其中山梨酸钾换算为山梨酸的系数是1.34。