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蜂蜜中青霉素残留量的测定方法(二)

发布时间:2019-02-26 00:00 作者:中国标准物质网 阅读量:794

5 仪器

5.1 均质器:转速不低于5 000 r/min,

5.2 离心机:转速不低于4 000 r/min.,

5.3 生化培养箱:(35±1)℃。

5.4 高压灭菌器。

5.5 培养皿:内径90 mm,底部平整光滑的玻璃皿或塑料皿,具陶瓦盖。

5.6 牛津杯:不锈钢小管,外径(8.0±0.1) mm,内径(6.0±0.1) mm,高度(10.0±0.1)mm。

5.7 游标卡尺:测量范围0mm~200mm,精度±0.02mm。

6 试样的制备与保存

6.1 样品的制备

将样品搅拌均匀。分出0.5 kg作为试样,制备好的试样置于样品瓶中,密封,并加以标识。

6.2 试样的保存

将样品于常温下保存。

7 测定步骤

7.1 提取

称取10g试样,精确至0.01g,置于50 mL离心管中。加入20 mL磷酸盐缓冲溶液(4.4.1)搅匀,静置10 min。用均质器均质1min(4000r/min)后离心30 min(4000r/min)。移取全部上清液到20 mL具塞试管中并用磷酸盐缓冲溶液定容至刻度。此溶液含试样量为0.5 g/mL。

7.2 测定

7.2.1 菌悬液用量的测定

在实际测定前,将不同浓度的菌悬液(4.7)加入定量的培养基1中培养,能使0.0125ug/mL浓度的青霉素标准工作溶液产生直径大于10 mm、清晰、完整的抑菌圈为最适菌悬液用量。

7.2.2 检定用平板的制备

将从7.2.1所得的最适菌悬液用量加入已溶化并冷至48~50℃左右的培养基1中,充分混匀并立即倾注在灭菌培养皿中,每平皿加入量为 9.0mL。置水平台上凝固后,在每个检定用平板中放置六个牛津杯,使每个牛津杯在半径为2.8cm的圆面成60o角间距。所用平板应当天制备。

7.2.3 标准曲线的制备

青霉素标准工作溶液(4.5.2)0.20、0.10、0.05、0.025和0.0125 ug/mL五个浓度中,0.05ug/mL标准工作溶液为参考浓度。

每个青霉素标准工作溶液(4.5.2)浓度除参考浓度(0.05ug/mL)外,各取三个检定用平板(7.2.2)为一组,四组共12个检定用平板。每个检定用平板中的三个牛津杯内注满参考浓度(0.05ug/mL)标准工作溶液,另三个牛津杯中则分别注满其他浓度的标准工作溶液。这样参考浓度(0.05ug/mL)标准工作溶液将得出36个抑菌圈直径读数的数据,其他浓度标准工作溶液将各得九个抑菌圈直径读数的数据。

盖好陶瓦盖,置(35±1)℃培养18 h±1h后取出,翻转平板,除去牛津杯,执游标卡尺准确地测量各抑菌圈直径(精确到0.1mm),求出各组平板中标准工作溶液浓度及参考浓度(0.05ug/mL),抑菌圈直径读数的平均值以及参考浓度(0.05ug/mL), 36个抑菌圈直径读数的总平均值。用参考浓度(0.05ug/mL)的总平均值减去各组参考浓度(0.05ug/mL)的平均值之差为校正值,以此值校正其他各浓度标准工作溶液及被测样品溶液抑菌圈直径读数的平均值。

将各组校正值代入式(1)和式(2)中,求出L和H值,在半对数坐标上,以抑菌圈直径(mm)为纵坐标(算术级),以标准工作溶液浓度(ug/mL)为横坐标(对数级),标出L和H点,连一直线,即为标准曲线。

L=(3a+2b+c-e)/5······(1)

H=(3e+2d+c-a)/5······(2)

式中:

L—标准曲线上最低浓度(0.0125ug/mL)的抑菌圈直径,单位为毫米(mm);

H—标准曲线上最高浓度(0.20 ug/mL)的抑菌圈直径,单位为毫米(mm);

c—参考浓度(0.05ug/mL)抑菌圈直径的总平均值,单位为毫米(mm);

a、b、d、e—分别表示标准曲线中其他各浓度标准工作溶液(0.0125、0.025、0.10、0.20ug/mL)抑菌圈直径数据的校正值,单位为毫米(mm)。

相关链接:蜂蜜中青霉素残留量的测定方法(一)

文章来源:《常用兽药残留量检测方法》

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