1 范围

本标准规定了牛奶和奶粉中卡巴氧代谢物喹噁啉-2-羧酸(quinoxaline-2-carboxylic acid)和喹乙醇代谢物3-甲基喹噁啉-2-羧酸(3-ethyl quinoxaline-2-carboxylic acid)残留量的液相色谱串联质谱测定方法。

本标准适用于牛奶和奶粉中卡巴氧代谢物喹噁啉-2-羧酸(quinoxaline-2-carboxylic acid)和喹乙醇代谢物3-甲基喹噁啉-2-羧酸(3-methyl quinoxaline-2-carboxylic acid)残留量的测定。

本标准的方法检出限：喹噁啉-2-羧酸和3-甲基喹噁啉-2-竣酸的方法检出限牛奶为0.5 ug/kg，奶粉为4.0 ug/kg。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 6379.1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分：总则与定义(GB/T 6379.1-2004,ISO 5725-1:1994,IDT)

GB/T 6379:2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GB/T 6379.2-2004,ISO 5725-2:1994,IDT)

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T 6682-2008,ISO 3696:1987,MOD)

3 原理

用甲酸溶液消化试样，使牛奶和奶粉中天然存在的酶失活，然后加入蛋白酶水解，盐酸酸化，离心过滤后，固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱仪测定，内标法定量。

4 试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

4.1 甲醇：色谱纯。

4.2 甲酸：色谱纯。

4.3 乙酸钠。

4.4 乙酸乙酯。

4.5 2％甲酸-乙酸乙酯溶液：向400 mL乙酸乙酯中加入10 mL甲酸，用乙酸乙酯定容至500 mL。

4.6 0.6％甲酸溶液：量取6.0 mL甲酸，用水溶解、定容至1 L。

4.7 0.1％甲酸溶液：量取1.0 mL甲酸，用水溶解、定容至1 L。

4.8 甲酸-甲醇溶液(19+1)：用190mL甲酸溶液(4.2)与10 mL申醇(4.1)混合。

4.9 0.1 mol/L盐酸溶液：量取8.3 mL浓盐酸，用水溶解、定容至1 L。

4.10 0.3 mol/L盐酸溶液：量取25 mL浓盐酸，用水溶解、定容至1 L。

4.11 Protease蛋白酶：SigmaP5147或相当者，-18℃以下保存。

4.12 0.01g/mL蛋白酶水溶液：称取1.00g Protease蛋白酶(4.11)，用水溶解、定容至100mL, 4℃保存。

4.13 10％乙酸溶液：量取100 mL乙酸，用水溶解、定容至1 L。

4.14 0.05 mol/L乙酸钠溶液：称取6.8g乙酸钠用800 mL水溶解，再滴加10％乙酸溶液以调节溶液pH=7，用水定容至1L。

4.15 乙酸钠-甲醇溶液(19+1)：用190 mL乙酸钠溶液(4.14)与10 mL甲醇(4.1)混合。

4.16 甲醇-水溶液(1+4)。

4.17 Tris碱：SigmaT1503或相当者。

4.18 1.0 mol/L Tris溶液：称取121g Tris碱(4.17)，用水溶解、定容至1 L,4℃保存。

4.19 喹噁啉-2-羧酸、3-甲基喹噁啉-2-羧酸、喹噁啉-2-羧酸-d4标准物质：纯度≥99％。

4.20 标准储备液：100mg/L。准确称取适量标准物质，分别用甲醇溶解定容，配成100mg/L的标准储备液，在-18℃以下保存。

4.21 基质混合标准工作溶液：根据灵敏度和使用需要，用空白样品提取液配成不同浓度(ug/L)的混合标准工作溶液，在4℃保存。

4.22 内标工作溶液：准确称取适量喹噁啉-2-羧酸-d4标准物质，用甲醇溶解定容，配成100ug/L的标准工作溶液，在4℃保存。

4.23 Oasis MAX固相萃取柱或相当者：60 mg,3 mL。用前分别用3 mL甲醇和3 mL水活化，保持柱体湿润。

4.24 滤膜：0.2 um。

5 仪器和设备

5.1 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。

5.2 固相萃取真空装置。

5.3 吹氮浓缩仪。

5.4 旋涡振荡器。

5.5 分析天平：感量0.1mg和0.01g。

5.6 真空泵。

5.7 低温离心机：可制冷到4℃，转速大于5000r/min。

5.8 移液器量程：10uL～100uL和100uL～1000uL。

5.9 聚丙烯离心管：15 mL和50 mL，具塞。

5.10 pH计：精度±0.02pH单位。

文章来源：《常用兽药残留量检测方法》

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