北京普天同创生物科技有限公司
6 试样制备与保存
6.1 试样的制备
6.1.1 牛奶:取有代表性试样约500 g,搅拌均匀后装入洁净容器内密封并做好标识。
6.1.2 奶粉:取有代表性试样约500 g,搅拌均匀后装入洁净容器内密封并做好标识。准确称取12g乳粉试样(精确到0.01g)于250 mL烧杯中,少量多次加入50 mL煮沸并冷却到60℃左右的水溶解,冷却至室温后,移入100 mL容量瓶中.用少量水分次淋洗烧杯,淋洗液一并移入容量瓶,再用水定容到刻度,棍匀,制备成奶粉复原乳试样。
6.2 试样的保存
将试样于4℃保存。
7 测定步骤
7.1 提取
准确称取10g牛奶试样(精确到0.01g)或量取10.00mL奶粉复原乳试样(6.1.2)于100 mL离心管中,加入50 mL乙腈(4.1),用均质器以15000r/min提取2min,用离心机以3000r/min离心5 min,上清液转入250 mL分液漏斗中,残渣中再加入30 mL乙腈(4.1),以15000r/min提取2 min,以3000r/min离心5 min,合并上清液于上述分液漏斗中,加入3g氯化钠(4.5),剧烈振荡3 min,静置分层后,除去分离的水层,乙腈层溶液通过装有10g无水硫酸钠(4.4)的漏斗过滤到200 mL鸡心瓶中,用适量乙腈(4.1)淋洗无水硫酸钠及漏斗,收集全部滤液,在低于40℃条件下旋转蒸发除去溶剂至干,残留物中加入约3 mL乙酸乙酯-环己烷溶液(4.6)溶解后,超声波提取1 min,提取液转入10 mL容量瓶中,重复操作三次,合并提取液,用乙酸乙酯-环己烷溶液(4.6)定容至刻度,摇匀。
7.2 凝胶渗透色谱净化
7.2.1 条件
凝胶渗透色谱条件如下:
a)凝胶渗透色谱柱:300 mm×10 mm,内装Bio Beads S-X3填料或者相当者j
b)检测波长:254 nm;
c)流动相:乙酸乙酯-环己烷溶液(4.6) ;
d)流速:5 mL/min;
e)进样量:5 mL;
f)开始收集时间:8.5 min;
g)结束收集时间:20 min。
7.2.2 净化
将上述提取液以3000r/min离心5 min,上清液过0.45um有机相滤膜(4.11),取5.00 mL提取液注入凝胶渗透色谱仪的色谱柱中,以乙酸乙酯-环己烷溶液(4.6)洗脱,收集8.5min~20 min的流出液,在低于40℃条件下浓缩至近干,用乙酸乙酯-环己烷溶液(4.6)定容到1.00mL,供气相色谱-质谱测定。
7.3 阴性样品提取液的制备
取不含啶酰菌胺的阴性牛奶或者奶粉样品,按7.1和7.2步骤制备阴性样品提取液,用于配制啶酰菌胺基质标准工作溶液。
7.4 气相色谱-质谱测定
7.4.1 仪器条件
气相色谱-质谱条件如下:
a)色谱柱:HP-5MS石英毛细管柱(30m×0.25 mm×0.25um)或相当者;
b)色谱柱温度程序:100℃保持1min,然后以30℃/min升温至280℃,保持8 min;
c)载气:氦气,纯度≥99.999%;
d)载气流速:1.0 mL/min;
e)进样口温度:290℃;
f)进样量:1 uL;
g)进样方式:不分流进样,1.5 min后打开分流阀和隔垫吹扫阀;
h)电子轰击源:70 eV;
i)离子源温度:230℃;
j)GC-MS接口温度:280℃;
k)驻留时间:100 ms;
1)选择离子监测:定量离子为140,定性离子为142、342。定量离子与定性离子的相对丰度比值,见表1。
表1 定量离子与定性离子的相对丰度比值
7.4.2 定性测定
在相同的实验条件下进行样品测定时,如果样品中待测物质的色谱峰保留时间与标准品色谱峰保留时间相差在±2.5%以内,并且在扣除背景后的样品质谱图中,所选择的离子均出现,且样品谱图中定性离子的相对丰度与浓度接近的基质标准校准溶液谱图中对应的定性离子的相对丰度进行比较,偏差不超过表2规定的范围,则可判定为样品中存在该种待测物。
表2 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差
文章来源:《常用兽药残留量检测方法》
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